細(xì)胞培養(yǎng)的概念：

    細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度,、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等）,，使之生存、生長,、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法,。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞,，通過細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞,，又可以借此研究細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝,、細(xì)胞的生長增殖等,。

細(xì)胞培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備：

細(xì)胞培養(yǎng)所需的試劑：

細(xì)胞培養(yǎng)的類別：

原代細(xì)胞(primary cell)是指從機(jī)體的組織中經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得,、并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞,。一般認(rèn)為,，培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。

細(xì)胞系(cell strain)：原代培養(yǎng)物經(jīng)胰酶等物質(zhì)第一次消化傳代后即為細(xì)胞系,，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞系所組成,。如果不能繼續(xù)傳代,，或傳代次數(shù)有限，可稱為有限細(xì)胞系,，如可以連續(xù)培養(yǎng),，則稱為連續(xù)細(xì)胞系，培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去,。

細(xì)胞株(cell line)：從細(xì)胞系中用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或篩選的方法,，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群，稱細(xì)胞株,。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在,。如果不能繼續(xù)傳代或傳代有限，稱為有限細(xì)胞株,；如果可以連續(xù)傳代,，稱為連續(xù)細(xì)胞株。

細(xì)胞培養(yǎng)的過程：

細(xì)胞復(fù)蘇：

將凍存的細(xì)胞從液氮中取出后,，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)直到*融化后放入離心機(jī)中,，800rpm-1000rpm，5min,，然后在超凈臺(tái)中將上清液棄掉,，加入1ml預(yù)熱的培養(yǎng)基，輕輕吹勻后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)足細(xì)胞生長所需的培養(yǎng)基,，呈“十"混勻后放入含5%CO₂的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代：

待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí),，棄去原培養(yǎng)基,，用5ml PBS清洗3次。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶,，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中（不同的細(xì)胞消化時(shí)間不同）,。待細(xì)胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍體積的含血清培養(yǎng)基進(jìn)行中和，輕輕吹吸混勻,，根據(jù)細(xì)胞生長特性進(jìn)行1：2或1：3傳代培養(yǎng),。

細(xì)胞凍存：

待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)，棄去原培養(yǎng)基,，用5ml PBS清洗3次,。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中（不同的細(xì)胞消化時(shí)間不同）,。待細(xì)胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍體積的含血清培養(yǎng)基進(jìn)行中和,，輕輕吹吸混勻，轉(zhuǎn)移到離心管中800rpm-1000rpm,，5min進(jìn)行離心,，然后在超凈臺(tái)中將上清液棄掉,，加入1ml凍存液，放入凍存盒內(nèi)（盒內(nèi)有異丙醇,，以保證梯度降溫）,，立即放入一80℃冰箱內(nèi)，第二天轉(zhuǎn)入液氮中,，可以保存至少兩年,。

凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO。

細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染及處理辦法：

真菌：一般培養(yǎng)基不會(huì)變渾濁,，保持清亮，顯微鏡下可觀察到絲狀物,，有的真菌剛開始會(huì)像細(xì)胞碎片,，慢慢會(huì)長出黑色絲狀物,，對(duì)細(xì)胞的生長有明顯的影響,。