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閾值,,我們在操作軟件時上下拉動的橫線,,是決定Ct值的因素之一。
閾值是熒光信號相對于基線有顯著增強的點,,大多數(shù)儀器會根據(jù)基線平均信號,,自動計算熒光信號的閾值水平,并設置一個比平均值高10倍的閾值,。
也就是說,,當基線被正確的設置了,閾值也能手動調(diào)整成正確值。
需要注意的是:
1,、讀取閾值相關的分析數(shù)據(jù)時,不能隨意改變閾值的設置,。只有分析不同樣本,,或相同樣本不同靶基因時,才能調(diào)整閾值,。
2,、設置閾值線時,要在擴增曲線的指數(shù)擴增區(qū)域內(nèi)設置,,不能在起始階段,,也不能在熒光背景(基線)區(qū)域。
3,、每次改變閾值時,,要查看標準曲線的斜率和R的平方有沒有改善。沒有使用標準曲線時,,也可以計算3個復孔(相同條件擴增的樣本)的標準偏差,。好的閾值應該要改善Ct值的表現(xiàn)。
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