您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)! 登錄| 免費(fèi)注冊(cè)| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),簡稱為 ELISA,。ELISA 實(shí)驗(yàn)是一種非常經(jīng)典的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),。雖然歷史非常悠久了,但是還是不斷地在臨床和基礎(chǔ)研究中得到應(yīng)用,。其主要用于:免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位,;研究抗酶抗體的合成;顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng),;定量檢測(cè)體液中抗原或者抗體成份,。小編總結(jié)了一些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)。遇到的問題,,可能的原因,,解決方法。供大家參考,。
問題 1:陽性與陰性不能達(dá)到 2.1 的比值,,陰性顏色太深。
可能的原因:陰性對(duì)照(也就是陽性對(duì)照的除目標(biāo)抗原外的其它成分)中有某種成分與一抗作用,。
解決的方法:純化抗原除去干擾成分,。
問題 2:陽性與陰性不能達(dá)到 2.1 的比值,陽性顏色太淺,。
可能的原因有 3 個(gè): 1)一抗效價(jià)不好,。 2)抗原太稀。 3)封閉時(shí)間過長,。
解決的方法: 1)換用一抗或增加一抗用量,。 2)增加抗原濃度。 3)縮短封閉時(shí)間,,封閉時(shí)間一般 37 攝氏度 3 個(gè)小時(shí),,或者 4 攝氏度過夜。不能比這個(gè)更長了,。
問題 3:增加抗原濃度,,一抗?jié)舛炔蛔?,顯色反應(yīng)沒有表現(xiàn)出應(yīng)有的梯度。
可能的問題: 一抗與抗原的比例已經(jīng)飽和,。
解決的方法: 增加一抗用量; 或在一抗用量不變的情況下減少抗原濃度做梯度,。
問題 4:增加一抗?jié)舛龋@色反應(yīng)沒有表現(xiàn)出應(yīng)有的梯度,。
可能的原因:一抗與抗原的比例已經(jīng)飽和,。
解決的方法:增加抗原用量;或在抗原用量不變的情況下減少一抗?jié)舛茸鎏荻取?/p>
問題 5:加完 TMB 顯色后顏色梯度很明顯,,但加了硫酸終止反應(yīng)后顏色梯度沒有那么明顯了,。
可能的原因:硫酸可能把其它成分都炭化了。
解決的辦法:加少一點(diǎn)硫酸,,參考值:50 μlTMB+35 μl 硫酸,;或者采用 1M 的 HCL 作為終止液,50ulTMB+50ul1M HCL,。
這些步驟里面,,一抗和封閉是兩個(gè)關(guān)鍵。如果 ELISA 做不出滿意的結(jié)果,,首先應(yīng)該從這兩個(gè)方面改進(jìn)。Elisa 實(shí)驗(yàn)看似簡單,,其實(shí)不然,。別小瞧了ELISA。光是一個(gè)加樣就有很多講究,。
ELISA 中加樣須注意如下問題:
吸取樣品時(shí),,加樣槍吸頭不應(yīng)黏附多余的液體;加樣時(shí)不可 90 度向孔中滴加液體,,這樣會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上,,加樣不準(zhǔn)確! 不要將吸頭伸入孔中,,一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭,,另一方面可能會(huì)將孔中的液體吹起來,加樣不準(zhǔn)確,! 正確的加樣方法應(yīng)為 45 度,,吸頭貼著孔壁加入,應(yīng)注意: 角度太小,,會(huì)使液體殘留在孔壁上,,導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確! 吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處,!
綜上所述,Elisa 實(shí)驗(yàn)看似簡單,,其實(shí)還是有很多細(xì)節(jié)需要我們注意的,。以上介紹了 Elisa 實(shí)驗(yàn)的一些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn),希望對(duì)大家有所幫助,。
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性,、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),,化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn),,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量,。