1.把要做的切片先分好,，做幾個(gè)抗體可分幾盒,，不正常組織與正常組織要分開,。其余做預(yù)實(shí)驗(yàn)用。 

2.選擇實(shí)驗(yàn)要做的抗體時(shí),，要結(jié)合他們的正常組織和癌組織的分別表達(dá)率,。

3.試劑盒的選擇可結(jié)合生物素強(qiáng)弱的情況。如：肝組織生物素含量高,，S-P 試劑盒生物素含量也高,，故不能配合使用。 

4.每次開始做時(shí),，都必須先清點(diǎn)實(shí)驗(yàn)的必需品是否齊全,。想好可能發(fā)生的意外，并先想好補(bǔ)救措施,。當(dāng)抗體不夠用的情況下,，原先買的抗體最好不要用完，留做可能需要的驗(yàn)證試驗(yàn),。新的抗體要盡量同公司,，同批號(hào)。

5.烤片（單一或綜合）程度要適情況而定,，可中途拿出甩一甩,，盡可能先放在烤箱里烤 3 小時(shí)以上。切勿把片烤得太久了,。程度剛好,，脫蠟效果才會(huì)好。注意做好不同條件的切片標(biāo)記,。注意溫度穩(wěn)定,，再烤片。 

6.二甲苯脫蠟,。溫度過低時(shí),，可先把二甲苯整罐放進(jìn)烤箱加熱，或者可把片放在二甲苯里一起加熱脫蠟,，這樣效果會(huì)更好,；若溫度適宜，那還是在室溫下脫蠟,，要不可能會(huì)適得其反,。時(shí)間也是適情況而定。

7.高壓修復(fù)時(shí),，要注意稀釋比例,，修復(fù)液的種類（EDTA 不可以重新進(jìn)行利用，可能發(fā)生交叉作用）,，PH 值等。高壓鍋內(nèi)壓力未降至正常時(shí)不可打開，壓力正常后可多放會(huì)兒,，能更好的利用余壓,，把握程度。若是多次修復(fù),，每次都需先把鍋內(nèi)熱水倒掉,，換冷水，保證條件的可重復(fù)性,。 

8.抗體反復(fù)凍融可使效價(jià)降低,。抗體要防止污染,。不可用塑料保存,，塑料可吸附抗體?？贵w稀釋：應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配"的原則,，對(duì)于 PBS（其他稀釋液，注意 PH 值,，PBS 為偏中堿性）稀釋的抗體最好要當(dāng)天使用,。稀釋比例恰好為佳，注意前帶和后帶效應(yīng),。

9.吹干封片時(shí)不能有泡泡,。若是沒封好，可進(jìn)行二甲苯,、酒精脫樹膠,，吹干再次封片，但鏡下效果會(huì)明顯變差,。因而,，若沒必要，最好不要再次脫膠,。DAB 顯色需用中性樹膠封片,，AEC （易溶于有機(jī)溶劑）需用水性膠封片。 

10.剛封完的載玻片會(huì)移動(dòng),，故切片還沒干時(shí),，盡量不要碰到蓋玻片，可避免樹膠溢出,，片的整體效果不好,。

附錄：臨床上常用免疫組化指標(biāo) 

通常惡性腫瘤，免疫組化耐藥預(yù)后標(biāo)記（共 4 個(gè) marker）為：P-gp,，GSTπ,，TOPOII,，Ki-67。而乳腺癌免疫組化耐藥預(yù)后標(biāo)記（共 7 個(gè) marker）為：P-gp,，GSTπ,，TOPOⅡ，Ki-67,，ER,， PR，C-erbB-2,。