DNA 純化是分子生物學研究中經(jīng)常需要用到的一種方法,。一般來說,，做DNA 純化有3 個目的：1. 獲得高純度的DNA,；2. 濃縮DNA,；3. 用DNA做測序,，芯片等生物信息學方面的實驗,。下面，談一談DNA純化的幾種常用方法,。

DNA 純化實驗基本上可以分為 PCR 清潔試劑盒純化法和DNA凝膠回收純化法兩大類,。PCR 清潔試劑盒純化法又稱為硅膠膜吸附法。因為它的原理是：硅膠膜可在高鹽條件下結(jié)合 DNA,， 又可在低鹽條件下與DNA分離,。而 DNA 溶液中的其他渣渣包括引物、單核苷酸,、酶,、礦物油、鹽離子等,，因為沒有 DNA 的這種神特性,，所以會被分離開來。  

如果你的 PCR 產(chǎn)物得到的是單一條帶,，*可以直接純化,。那么問題來了。如果發(fā)現(xiàn)有雜帶,？怎么辦,？有哪些辦法可以提取得更干凈？

那么就誕生了我們的第二種方法：DNA 凝膠回收純化法,。這種方法簡單粗暴有效率,，也能純化得比較*。現(xiàn)在已經(jīng)慢慢地取代了第一種方法，成為了DNA 純化的主流方法,。 擴增時出現(xiàn)非特異性條帶,，那么在膠回收時切膠很重要，切膠時盡量選擇目的基因條帶,，可以將目的基因所在的膠的邊緣棄去一些,，盡量不要切上含有非特異性帶的膠。切膠之后就是回收了,，這里分享個小竅門,，回收可以用酚氯仿。

PCR 產(chǎn)物經(jīng)過酶切,、回收等步驟后,，損失太大。合適的做法是：簡化步驟,、減少核酸在處理過程中的損失,，讓較多量的 PCR 產(chǎn)物和質(zhì)粒片斷進入酶連反應(yīng)——以量取勝。DNA 凝膠回收純化法是很粗放型的,，但是成功率很高,。如果愿意，你可以試試,。

大致的做法是：制作 100 μL PCR 產(chǎn)物,；酒精沉淀回收 PCR 產(chǎn)物；PCR 產(chǎn)物及載體酶切,；跑回收膠,；將回收膠上的 PCR 產(chǎn)物和載體片斷切下，回收到一個試管中,；冰凍,、碎膠，酚,、氯仿 抽提,，酒精沉淀；加入8微升水,、1 微升連接酶和 1 微升連接 buffer,，4 度過夜；轉(zhuǎn)化涂板,。

PCR 產(chǎn)物回收 

1. 制備 100μL PCR 產(chǎn)物,。 

2. 將 100μL PCR 產(chǎn)物加入一 1.5mL 離心管中，再加入 400μL 雙蒸水,，顛倒混勻。加入 900μL  預(yù)冷無水乙醇,、20μL3M 的醋酸鈉,。顛倒數(shù)次混勻,。（提示 本方法使用的醋酸鈉量較小，但足夠沉淀核酸,，并且無需洗鹽,。） 

3. 4℃靜置 30 分鐘，以利于核酸沉淀,。 

4. 12000rpm 4℃ 離心 15 分鐘,，沉淀核酸。 

5. 棄上清,，將離心管倒置于干凈吸水紙巾上 5 分鐘,。室溫下吹風干燥。（提示 可將試管置于超凈臺吹風干燥,。如果管底有較多液體聚集,，可蓋好管蓋后，輕彈管底數(shù)次,，將液體分散掛在管壁上,，再打開管蓋吹風。） 

酶切直接在回收 PCR 產(chǎn)物的試管中配置酶切體系,。1%瓊脂糖回收膠回收（碎膠,、酚氯仿抽提法）。 

綜上所述,，純化的主要目的就是要去除蛋白質(zhì),。而酚氯仿混合液能有效地使蛋白質(zhì)變性，同時抑制 RNAase 的活性,，酚氯仿還可以減少酚在核酸溶液中的痕量,。所以是一種好東西。