外泌體（exosome）是一種由細(xì)胞內(nèi)多泡體(multivesicular body，MVB) 與細(xì)胞膜融合后,，分泌到細(xì)胞外基質(zhì)中的膜性囊泡,。在正常的生理過程中發(fā)揮著介導(dǎo)細(xì)胞間通訊的重要功能，可用于監(jiān)測臨床狀態(tài),，治療反應(yīng),，疾病進(jìn)展等，同時(shí)由于它們具有遞送生物分子的功能,，因此它們還有發(fā)展成臨床藥物遞送載體的潛力,。
外泌體產(chǎn)生于所有類型的動植物細(xì)胞,，并且不同細(xì)胞、不同生長狀態(tài)的細(xì)胞分泌的外泌體差異性很大,，因此,，為了得到更高濃度、異質(zhì)性相對較小的外泌體,，細(xì)胞培養(yǎng)上清是外泌體的最佳來源途徑,，細(xì)胞培養(yǎng)上清中外泌體濃度低、粒徑小,、粒徑分布廣（30-150nm,，可能有大囊泡存在），實(shí)時(shí)定量監(jiān)控外泌體分泌情況是工程化外泌體生產(chǎn)的重點(diǎn)也是難點(diǎn),。
納米庫爾特粒度儀（電阻法RPS）可在單顆粒水平對外泌體進(jìn)行粒徑濃度分析,，可無標(biāo)記直接檢測任何培養(yǎng)基類型的細(xì)胞培養(yǎng)上清中的外泌體，精準(zhǔn)得到外泌體樣本中的完整,、真實(shí)的粒徑濃度分布,，并且3-5分鐘即可完成檢測，是外泌體培養(yǎng)工藝開發(fā)中的得力助手,，可助力篩選最佳的培養(yǎng)基以及培養(yǎng)條件。
01篩選無外源性培養(yǎng)基
傳統(tǒng)的培養(yǎng)基都會用到牛血清以補(bǔ)充細(xì)胞所需營養(yǎng),，但血清會或多或少引入外源性的外泌體,，從源頭上造成了后續(xù)外泌體樣本的污染。通過其他成分代替牛血清,，或者經(jīng)過分離除去外泌體,，已經(jīng)有各種類型的無外源性外泌體培養(yǎng)基上市，但都真正做到了沒有污染嗎,？針對這種疑問,，筆者選取了八種不同的聲稱無外源性外泌體的培養(yǎng)基進(jìn)行測試。
圖1.外泌體培養(yǎng)基測試
通過測試可見,，并非所有的培養(yǎng)基都做到了真正的無外源性外泌體,，還需擦亮您的眼睛，借助納米庫爾特粒度儀對其進(jìn)行嚴(yán)格的篩選,，挑選合適的培養(yǎng)基,。
02培養(yǎng)條件優(yōu)選
在通常的外泌體培養(yǎng)過程中，都是分離富集后再進(jìn)行測定,，若純度過低或含量太少,，不符合下游研發(fā)需求，則需要重新進(jìn)行培養(yǎng),，消耗大量的時(shí)間成本;亟需一種準(zhǔn)確,、可靠和快速的方法實(shí)時(shí)監(jiān)控細(xì)胞培養(yǎng)過程中外泌體的分泌含量,，使科研工作事半功倍，納米庫爾特粒度儀十分符合這種應(yīng)用場景,，使外泌體的研發(fā)更高效,。
圖2.外泌體培養(yǎng)上清實(shí)時(shí)跟蹤測試
在對某培養(yǎng)條件的細(xì)胞上清進(jìn)行跟蹤測試后發(fā)現(xiàn)，外泌體的濃度在培養(yǎng)第5天時(shí)達(dá)到峰值,，往后濃度有所降低,，并且粒徑分布也有所變化。
總結(jié)：
納米庫爾特粒度儀（電阻法RPS）在外泌體生產(chǎn)工藝研發(fā)應(yīng)用中有以下優(yōu)勢：
1.方便快捷,，可以做到實(shí)時(shí)監(jiān)測,。
2.與樣本折射率無關(guān)，可應(yīng)對各種成分的培養(yǎng)基,。
3.單顆粒檢測,，大小囊泡之間無互相影響，可得到真實(shí)的粒徑分布數(shù)據(jù),。
4.直接檢測外泌體體積粒徑,，粒徑準(zhǔn)確度媲美電鏡。
5. 精準(zhǔn)的濃度測量,，可分析不同粒徑范圍內(nèi)的顆粒濃度,。
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