細胞復蘇新方案,,IKA MATRIX 恒溫混勻儀
細胞復蘇新方案,,IKA MATRIX 恒溫混勻儀
細胞生物學實驗的日常,,都是跟細胞培養(yǎng)、凍存和復蘇這些基本的操作密不可分的,。在細胞凍存和復蘇領域一直奉行著一條黃金法則,,那就是“慢凍快融"! 實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力,。
細胞是很脆弱的,,尤其是哺乳動物細胞,只有一層薄薄的細胞膜,,沒有堅固的細胞壁保護,,在進入凍存狀態(tài)前,緩慢的降溫過程有助于保存細胞的活力,。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜(DMSO)作保護劑,,這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min,;當溫度達-25℃以下時,,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,,則可迅速浸入液氮中,。
細胞復蘇,,是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細胞解凍之后重新培養(yǎng),細胞恢復生長的過程,。復蘇細胞應采用快速融化的方法,,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內(nèi)融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結晶對細胞造成的損傷
水作為一種使用廣泛的導熱介質(zhì),,具有良好的導熱性,,可以保證快速加熱,同時也可防止凍存管內(nèi)部的局部過熱,。水浴是細胞培養(yǎng)實驗室的標準配置之一,,在進行細胞復蘇實驗時,無需額外的輔助設備或試劑,。然,,水浴經(jīng)常是作為實驗室共享的設備,若無專人值守,,則水浴槽內(nèi)的水不會定期進行更換,,就會攜帶污染,會間接導致復蘇細胞的污染風險,。復蘇過程,,常伴隨著對凍存管的晃動(晃動可以防止管內(nèi)樣品產(chǎn)生溫度差異),管蓋處也有滲入水的可能,。