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LNCaP clone FGC 人前列腺癌細胞
LNCaP【LNCaP】 | |
l 細胞鑒定 | STR鑒定已通過 |
l 細胞來源 | 國家資源庫 |
l 細胞背景 | 人前列腺癌細胞LNCaP克隆FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結針刺活檢中分離,，該患者經確診為前列腺癌轉移。這株細胞對5-α-二氫睪酮(生長調節(jié)子和酸性磷酸脂酶產物)有響應,。 |
l 培養(yǎng)條件： | 1) 準備： 1640 （推薦awcell-0002）; 優(yōu)質胎牛血清10%; Glutamax（invitrogen 35050） 1%; Sodium pyruvate（invitrogen 11360070) 1 %; p/s 1% 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。 |
l 注意事項：
| 培養(yǎng)注意事項： a. 需使用Corning的cellbind細胞培養(yǎng)瓶,貨號是3289 ,。 b. 這株細胞并不形成一致的單層，而是形成集落,。傳代時如胰酶消化后細胞形成聚團,，可以用滴管反復吹吸打碎。 c. 該細胞僅僅輕輕地吸附在基底上,，不形成匯合,，很快使培養(yǎng)基變酸。 生長很慢,。 傳代后48小時內不應擾動,。 d. 細胞封包、寄出時,，多數細胞從培養(yǎng)瓶底分離,，懸浮在培養(yǎng)基中。 收到后,，在通常培養(yǎng)單層細胞的條件下培養(yǎng)24到48小時,，以使細胞再貼壁。 此后可以換上新鮮培養(yǎng)液,。 如果需要，培養(yǎng)瓶內容物可以收集,，300g離心15分鐘,，以適量培養(yǎng)液重懸并培養(yǎng)到一個單獨的培養(yǎng)瓶中。 1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行,。 3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。 4）運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。 |
l 運輸形式： | 低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。 常溫（2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。 |
l 生物安全 | 1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。 2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮。解凍時,，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。 |
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