日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國(guó)家資源庫

l 細(xì)胞背景

來源于一位36碎白人女性,，MCF 10A 來源于群體中的貼壁細(xì)胞,。MCF 10A 細(xì)胞系是一種非致瘤性上皮細(xì)胞系,。細(xì)胞上皮唾液黏蛋白,、細(xì)胞角蛋白和乳脂肪球抗原呈陽性,。它們?cè)谀z原蛋白中表現(xiàn)出三維生長(zhǎng),，并在融合培養(yǎng)物中形成圓頂。到目前為止,，細(xì)胞沒有顯示出終末分化或衰老的跡象,。該線對(duì)胰島素、糖皮質(zhì)激素,、霍亂腸毒素和表皮生長(zhǎng)因子 (EGF) 有反應(yīng),。通過電子顯微鏡，細(xì)胞顯示管腔導(dǎo)管細(xì)胞的特征,，但不顯示肌上皮細(xì)胞的特征,。它們還表達(dá)通過與 MFA-Breast 和 MC-5 單克隆抗體的陽性反應(yīng)檢測(cè)到的乳腺特異性抗原,。培養(yǎng)基中的鈣含量對(duì)細(xì)胞的形態(tài)有很強(qiáng)的影響,。

l 培養(yǎng)條件：

1）準(zhǔn)備MEGM kit培養(yǎng)基 （Lonza/Clonetics,CC-3150）備注：培養(yǎng)基包含（A+B）

A :  MEBM基礎(chǔ)培養(yǎng)液 （貨號(hào)CC-3151）        

B:  細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑 5管 （貨號(hào)CC-4136）        5管

1)  CC-4009G      BPE            2.0ml

2)  CC-4017G      hEGF           0.5ml

3)  CC-4021G      INSULIN        0.5ml

4)  CC-4031G    HYDROCORTISONE  0.5ml

5)  CC-4081G      GA-1000         0.5ml

C: 霍亂毒素（cholera toxin）（awcell-8070） (100ng/ml) 500 ul

D:  P/S青霉素-鏈霉素 （awcell-15140-122）        5 ml

2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，100%,； 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

l 注意事項(xiàng)：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套,、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏,，并會(huì)慢慢充滿液氮,。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害,。