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l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國家資源庫

l 細(xì)胞特性

1） 來源：人,、女性,、外周血

2） 形態(tài)：成淋巴瘤細(xì)胞,，懸浮和輕微的貼壁

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

6）用途：僅供科研使用,。

l 培養(yǎng)條件：

1）準(zhǔn)備1640（推薦：awcell-0002）基礎(chǔ)培養(yǎng)基, 優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %，P/S青霉素-鏈霉素 1%

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

l 注意事項：

注意事項：

a.該細(xì)胞同時存在懸浮生長和輕微的貼壁狀態(tài),。

b.該細(xì)胞復(fù)蘇后需培養(yǎng)2周左右時間,，才能恢復(fù)正常生長狀態(tài)。

c.細(xì)胞密度不可過高,，在細(xì)胞匯合前進(jìn)行傳代,，否則容易成團(tuán)。

參考傳代比例: 1:3-1:6,，參考換液頻率: 2-3天

該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,，傳代可以參考以下方法：

1） 懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞,，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加*培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×106個/mL（不同細(xì)胞對密度要求不同,，具體可以參考細(xì)胞說明書）可以維持細(xì)胞的正常生長,。懸浮細(xì)胞的收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中,。棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2)．貼壁細(xì)胞的的消化，pbs清洗1-2次 由于細(xì)胞貼壁不牢,，pbs清洗過程中會有細(xì)胞脫落，所以pbs清洗液需要收集到離心管中,。清洗后的貼壁細(xì)胞按正常的貼壁細(xì)胞處理,。加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%血清的培養(yǎng)基來終止消化,。

3）將收集到的懸浮細(xì)胞，消化下貼壁細(xì)胞和pbs清洗液中的細(xì)胞以1000rpm,5min離心重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3 細(xì)胞凍存：收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

l 生物安全

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮。解凍時,，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。