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l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國(guó)家資源庫(kù)

l 細(xì)胞背景

NCI-H295R細(xì)胞是源于多能腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞系NCI-H295細(xì)胞,，后者由Gazdar·A·F等建立,，從腎上腺皮質(zhì)的腫瘤中分離而來。NCI-H295細(xì)胞經(jīng)改變培養(yǎng)條件獲得了NCI-295R細(xì)胞,，群體倍增時(shí)間從原來的5天減為2天,。NCI-295細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)，而NCI-H295R細(xì)胞呈單層貼壁生長(zhǎng),。NCI-H295R細(xì)胞保留了產(chǎn)生雄激素的能力,，對(duì)血管緊張素Ⅱ和鉀離子有反應(yīng)。

注意：c.793C>T 中的其他 TP53 突變?cè)?PubMed= 1630814 中錯(cuò)誤指示,。

l 細(xì)胞特性

1） 來源：腎上腺

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣 貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用,。

l 培養(yǎng)條件

1）準(zhǔn)備DMEM/F12（推薦awcell-0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,； Insulin ，6.25μg/mL,；Transferrin,，6.25μg/mL＋+Selenium，6.25ng/mL,；5.35μg/mL,，LinoleicAcid（sigma，L5900）,；p/s雙抗,，1%。2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

l 注意事項(xiàng)

注：其中胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒可以購(gòu)買商業(yè)成品ITS( awcell,awcell-4507;LONZA,17-838Z;GIBCO,41400-045 )

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

l 運(yùn)輸形式

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。

常溫: （2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

l 生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏,，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí),，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害,。