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l 細(xì)胞鑒定

免疫熒光鑒定鑒定已通過(guò)

l 細(xì)胞來(lái)源

國(guó)家資源庫(kù)（上海中科院）

l 細(xì)胞背景

HUVEC比較久之前由美國(guó)ATCC建系,， 后來(lái)被廣泛使用,，但是近些年發(fā)現(xiàn)細(xì)胞源頭存在交叉污染,，目前已經(jīng)被國(guó)際下架，美國(guó)也發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞存在問(wèn)題,，于是新建一個(gè)全新的HUVE-C 但是目前這個(gè)細(xì)胞引進(jìn)到國(guó)內(nèi)后種子都狀態(tài)很差,，不能使用。因此市場(chǎng)上很難找到可以使用的狀態(tài)好的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVE-C細(xì)胞,。本公司也是由于沒(méi)有合適的細(xì)胞同時(shí)狀態(tài)好也準(zhǔn)確,，所以我們做了國(guó)內(nèi)原代細(xì)胞永生化建系得到一個(gè)全新的準(zhǔn)確細(xì)胞：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞。提供單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞marker免疫熒光鑒定,。細(xì)胞叫：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化細(xì)胞,，和huve-c是同一個(gè)類(lèi)型的細(xì)胞，都是屬于人的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,，只是叫法不同,，并且由于是國(guó)內(nèi)建系的,，因此不能提供STR鑒定，而是提供免疫熒光鑒定,。

l 細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：人臍帶組織

2） 形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣 貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用,。

l 培養(yǎng)條件：

1）準(zhǔn)備內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系（推薦：PriMed-awcell-002）      

內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基                  93%

胎牛血清（FBS）                               5%

內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑                          1%

青霉素/鏈霉素，P/S                             1%

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項(xiàng)：

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化,。

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

l 生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù),，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套,、衣服和戴上防護(hù)面罩,。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿(mǎn)液氮,。解凍時(shí),，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害,。