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HUVEC 人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化

l 細胞鑒定

免疫熒光鑒定鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫（上海中科院）

l 細胞背景

人臍靜脈內(nèi)皮細胞系HUVEC比較久之前由美國ATCC建系， 后來被廣泛使用,，但是近些年發(fā)現(xiàn)細胞源頭存在交叉污染,，目前已經(jīng)被國際下架，美國也發(fā)現(xiàn)了細胞存在問題,，于是新建一個全新的HUVE-C 但是目前這個細胞引進到國內(nèi)后種子都狀態(tài)很差,，不能使用。因此市場上很難找到可以使用的狀態(tài)好的人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVE-C細胞,。本公司也是由于沒有合適的細胞同時狀態(tài)好也準確,，所以我們做了國內(nèi)原代細胞永生化建系得到一個全新的準確細胞：人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化細胞。提供單個內(nèi)皮細胞marker免疫熒光鑒定,。細胞叫：人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化細胞,，和huve-c是同一個類型的細胞，都是屬于人的臍靜脈內(nèi)皮細胞,，只是叫法不同,，并且由于是國內(nèi)建系的，因此不能提供STR鑒定,，而是提供免疫熒光鑒定,。

l 細胞特性

1） 來源：人臍帶組織

2） 形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣 貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1）準備內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系（推薦：PriMed-awcell-002）      

內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基礎培養(yǎng)基                  93%

胎牛血清（FBS）                               5%

內(nèi)皮細胞培養(yǎng)添加劑                          1%

青霉素/鏈霉素,，P/S                             1%

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

l 注意事項：

人臍靜脈內(nèi)皮細胞系HUVEC對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10?S的培養(yǎng)基來終止消化,。

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

l 生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮,。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。