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l 細胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞背景

NCI-H295R細胞是源于多能腎上腺皮質(zhì)癌細胞系NCI-H295細胞,，后者由Gazdar·A·F等建立，從腎上腺皮質(zhì)的腫瘤中分離而來。NCI-H295細胞經(jīng)改變培養(yǎng)條件獲得了NCI-295R細胞,，群體倍增時間從原來的5天減為2天,。NCI-295細胞懸浮生長，而NCI-H295R細胞呈單層貼壁生長,。NCI-H295R細胞保留了產(chǎn)生雄激素的能力,，對血管緊張素Ⅱ和鉀離子有反應(yīng)。

注意：c.793C>T 中的其他 TP53 突變在 PubMed= 1630814 中錯誤指示,。

l 細胞特性

1） 來源：腎上腺

2） 形態(tài)：上皮細胞樣 貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件

1）準備DMEM/F12（推薦awcell-0002）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%； Insulin ,，6.25μg/mL,；Transferrin，6.25μg/mL＋+Selenium,，6.25ng/mL,；5.35μg/mL，LinoleicAcid（sigma,，L5900）,；p/s雙抗，1%,。2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

l 注意事項

注：其中胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒可以購買商業(yè)成品ITS( awcell,awcell-4507;LONZA,17-838Z;GIBCO,41400-045 )

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

4）運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

l 運輸形式

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。

常溫: （2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

l 生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮。解凍時,，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。