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l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過(guò)

l 細(xì)胞來(lái)源

國(guó)家資源庫(kù)

l 細(xì)胞背景

1964年源自一位44歲白人女性,，HT-29細(xì)胞系由J.Fogh用移植培養(yǎng)方法和含15%FBS的F12培養(yǎng)液從原發(fā)性腫瘤分離,。近來(lái)，已建株的培養(yǎng)細(xì)胞用含血清McCoy’s 5A培液培養(yǎng),。在裸鼠中,；形成與結(jié)腸原發(fā)性（I 級(jí)）一致的分化良好的腺癌,；用類固醇治療的倉(cāng)鼠也會(huì)形成腫瘤。

注意：在 PubMed= 11921276 中指出起源于腸直腸乙狀結(jié)腸部分的腺癌,，但僅在最早的出版物 (DOI= 10.1007/978-1-4757-1647-4_5 ) 中指出為結(jié)腸腺癌,。

l 細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：結(jié)腸癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用,。

l 培養(yǎng)條件：

1）準(zhǔn)備McCOY's 5A（推薦awcell-0011）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；雙抗,，1%.

2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

l 注意事項(xiàng)：

注意事項(xiàng)：HT-29復(fù)蘇后第一周可能會(huì)有大量漂浮細(xì)胞，可更換新鮮培養(yǎng)液,，同時(shí)將漂浮的細(xì)胞離心收集后加回到培養(yǎng)瓶中與貼壁細(xì)胞共同培養(yǎng),。新復(fù)蘇的細(xì)胞會(huì)以補(bǔ)丁形態(tài)三維接觸生長(zhǎng)（即不是單層扁平生長(zhǎng)），待細(xì)胞分裂生長(zhǎng)后將會(huì)變回上皮細(xì)胞形態(tài)單層扁平生長(zhǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化,。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用,。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

 1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套,、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏,，并會(huì)慢慢充滿液氮,。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害,。