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l 細胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞背景

HK-2（人類腎臟 2）是一種源自正常腎臟的近端腎小管細胞 (PTC) 系。通過用人乳頭瘤病毒 16 (HPV-16) E6/E7 基因轉導使細胞永生化。根據Southern 和FISH 分析，該細胞系似乎源自單個細胞,。人腎近曲小管細胞HK-2含有HPV-16 E6/E7基因的重組逆轉錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7。盡管pLXSN 16 E6/E7對新霉素有抗性,，但不能用G418分離轉導的克隆,。該細胞系基于Southern和FISH分析可分離成單個細胞。通過PCR測定,，E6/E7基因存在于HK-2基因組中,。細胞保留分化良好的PTCs表型。堿性磷酸酶,、γ谷氨酰轉肽酶,、亮氨酸氨肽酶、酸性磷酸酶,、細胞角蛋白,、α3、β1整聯(lián)蛋白和纖連蛋白表達陽性,。VIII因子相關抗原,、6.19抗原和CALLA內肽酶表達為陰性。HK-2細胞保留著近端腎小管上皮細胞的功能特征,，例如Na+依賴性/根皮苷敏感性糖轉運和腺苷酸環(huán)化酶對甲狀旁腺有響應,，但對抗利尿激素不敏感。該細胞具有生成和儲存糖原的能力來證明,。HK-2細胞貼壁生長,，在甲基纖維素，軟瓊脂上不生長且不能懸浮生長,。每個批次均通過本庫支原體檢測,，結果為陰性。

l 細胞特性

1） 來源：腎皮質/近端小管

2） 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1）準備 角質細胞無血清培養(yǎng)基 (推薦：awcell-0019培養(yǎng)基,，包含兩個組份：基礎培養(yǎng)基1瓶+生長因子1管）或者 Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019) ,，添加對應因子,，1% P/S 來培養(yǎng)細胞。

備注:Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019)培養(yǎng)液包含兩個組份：基礎培養(yǎng)基1瓶（貨號10785-012）+生長因子1管( 貨號10784-015）

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

備注：

1. 該細胞貼壁較慢,，為使細胞貼壁更容易,，建議可提前在培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶中鋪0.25%的明膠溶液，并于貼壁24~48小時后再進行后續(xù)操作,。

2. 該細胞生長不能過密,，請在生長密度80%時進行傳代。

3.使用0.05%胰酶消化細胞,，由于Defined K-SFM為無血清培養(yǎng)液無法終止胰酶消化,，所以消化完成后要通過離心（建議125xg離心5到10分鐘）去除胰酶或者用帶10%血清的培養(yǎng)基來終止消化，再進行后續(xù)操作,。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。

4）運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

l 生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作,，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮,。解凍時,，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害,。