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l 細(xì)胞鑒定

種屬鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國家資源庫

l 細(xì)胞背景

此細(xì)胞株是C57/L小鼠中產(chǎn)生的BW7756小鼠肝癌細(xì)胞的衍生株。檢測表明鼠痘病毒（ectromelia virus,，ECTV）陰性,。每個批次均通過本庫支原體檢測，結(jié)果為陰性,。

l 細(xì)胞特性

1） 來源：肝

2） 形態(tài)：上皮樣細(xì)胞  貼壁生長

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5) 用途：僅供科研使用,。

l 培養(yǎng)條件：

1）準(zhǔn)備 DMEM（含NaHCO3 1.5g/L）基礎(chǔ)培養(yǎng)基 （awcell-128-0001 ）              88 %

      優(yōu)質(zhì)胎牛血清 （awcell-0500）                                                                  10 %

      Sodium Pyruvate丙酮酸鈉 ( awcell-01100 )             1 %

       P/S青霉素-鏈霉素 （awcell-15140-122）                                            1 %

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

l 注意事項：

注意:該細(xì)胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長良好，大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO3（3.7g/L）,，若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞時需要提高CO2濃度（7%-10%）,。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用,。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

l 生物安全:

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮,。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。