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l 細胞鑒定

種屬鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞背景

CT26細胞是被N-亞硝基-N-甲基脲烷（NNMU）誘導得到的未分化的小鼠結腸癌細胞,，該細胞的一個克隆形成的細胞系被命名為CT26.WT,。CT26.WT被逆轉錄病毒載體LXSN穩(wěn)定轉化形成了一個致死性的亞克隆CT26.CL25,，這一病毒載體含有lacZ基因,、編碼腫瘤相關抗原（TAA）和beta半乳糖苷酶。CT26.WT和CT26.CL25細胞在小鼠中生長速度和致死率都很相似,，不同的是CT26.CL25細胞可以表達腫瘤相關抗原和beta半乳糖苷酶,，因此這兩株細胞可以聯(lián)合用于免疫治療和宿主免疫反應的研究。

l 細胞特性

1） 來源：小鼠結腸癌

2） 形態(tài)：成纖維細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用,。

l 培養(yǎng)條件：

1） 準備RPMI-1640（推薦awcell-0002）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。 

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

l 生物安全:

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮,。解凍時,，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。