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l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國家資源庫

l 細(xì)胞背景

AN3CA細(xì)胞1962 年從一名 55 歲白人女性的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中建立。該女性患有子宮內(nèi)膜腺癌（上皮未分化小細(xì)胞型）,。它衍生于子宮內(nèi)膜癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織,，具有癌細(xì)胞的基本特性，能在體外長期傳代培養(yǎng),，接種實(shí)驗(yàn)動物產(chǎn)生明顯腫瘤,。但細(xì)胞的生物學(xué)特性及超微結(jié)構(gòu)尚未深入研究，僅發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞系促黑激素合成為陰性,。細(xì)胞常用于人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)及其相關(guān)特性研究,。該細(xì)胞裸鼠中可致瘤。

l 細(xì)胞特性

1） 來源：子宮內(nèi)膜

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣,，貼壁生長,。上皮細(xì)胞生長為貼壁單層；突出的細(xì)胞質(zhì)囊泡

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用,。

l 培養(yǎng)條件：

1） 準(zhǔn)備MEM（推薦awcell-0012）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項(xiàng)：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用,。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

l 生物安全:

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套,、衣服和戴上防護(hù)面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮,。解凍時,，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害,。