海馬椎體神經(jīng)元是海馬區(qū)的主要成分,,主要功能是參與近期記憶,、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié)、是老年性癡呆,、癲癇等疾病的主要病灶之一,。小鼠海馬神經(jīng)元細胞培養(yǎng)是研究神經(jīng)細胞生物學特性和外源干擾因素作用(細胞因子)的有效細胞模型,其在神經(jīng)生物學,,發(fā)育生物學體外實驗研究中已被廣泛應用,。
一、傳代培養(yǎng)
傳代前準備--胰蛋白酶消化--吹打分散細胞--分裝稀釋細胞--繼續(xù)培養(yǎng)
1)將培養(yǎng)瓶內(nèi)舊的培養(yǎng)液棄掉,,然后用D-Hanks液洗兩次,,(一定要洗干凈,,以免影響胰酶的消化作用)。
2)加入0.25%胰酶-EDTA消化,,25cm培養(yǎng)瓶加0.4ml,,37度消化5min,鏡下看到細胞變圓,,間隙增大,。
3)立即加含10%FCS的培養(yǎng)液終止消化,用細胞刮刀輕刮,,注意,,這時候用吸管吹不下來,但是刮刀卻很容易刮下來,,而且對細胞的損傷極小,。
4)離心,棄上清,,加新的培養(yǎng)液(10%FCS),,小心吹勻,分裝入新的培養(yǎng)瓶,。
二,、注意事項
1、不要輕易改變培養(yǎng)液,,我曾經(jīng)把MEM換成1640后,,細胞傳幾代后莫名其妙死亡。
2,、如果想節(jié)省消化液,,上面第2步可換成3-5mlDPBS洗,主要是去除培養(yǎng)瓶里會影響消化液作用的成分,。
3,、自配消化液一定要調(diào)PH(=7.8-8)值,并且注意分裝,,-20度保存,,避免反復凍融,用前37度預熱,,消化較好較快,。
4、嚴格的無菌操作,。
5、適度消化:消化的時間受消化液的種類,、配制時間,、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響,,消化過程中應該注意培養(yǎng)細胞形態(tài)的變化,一旦胞質回縮,,連接變松散,,或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。
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