臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞是一種來(lái)源于臍帶組織的干細(xì)胞,,它是臍靜脈的重要組成細(xì)胞之一,,理論上能夠進(jìn)行無(wú)限的傳代,所以進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,,常選擇人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,。
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC),,常作為內(nèi)皮細(xì)胞功能和病理學(xué)的研究模型,,應(yīng)用于血管生成、愈合,、血管建模,、組織工程、炎癥,、腫瘤等研究中,。
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的操作流程:
1.產(chǎn)科無(wú)菌取臍帶1根,置于含保鮮液的廣口試劑瓶中4℃保存(避免污染),,在最短的時(shí)間內(nèi),,將臍帶攜入實(shí)驗(yàn)室,,進(jìn)行以下操作。
2.在超凈工作臺(tái)或無(wú)菌層流工作臺(tái)上,,將臍帶用D-Hank溶液清洗干凈,,將靜脈插管插入臍靜脈中,并用絲線結(jié)扎,、固定,。
3.用20ml注射器將37℃的D-Hanks溶液注入臍靜脈,反復(fù)沖洗至清洗液無(wú)色澄清為止,。
4.用血管鉗夾住臍靜脈的另一端,,并將0.2%的Ⅰ型或Ⅱ型膠原酶(約20ml)通過(guò)靜脈插管注入臍靜脈中,至臍靜脈充盈為止(排掉靜脈管中的空氣),。
5.將臍帶放置在盛有37℃水的玻璃燒杯中,,在37°C水浴條件下消化約20min(每5min抽吸/注入1次)。
6.當(dāng)酶液變成混濁時(shí)(在顯微鏡下可見(jiàn)大量游離細(xì)胞),,將酶液在臍靜脈中反復(fù)抽吸沖打3次后,,吸出并置于50ml離心管中。
7.細(xì)胞懸液經(jīng)350g離心5min后,,棄去上清液,,并用D-Hanks溶液清洗2次,然后再以350g離心5min,。
8.棄去上清液,,將細(xì)胞溶于8ml內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液(M l99 80ml、FBS 20ml,、PS 1ml,、L-Gln 2mM、ECGS 10mg/100ml,、Heparan 4000U/1 00ml,、Insulin mu/100ml)中,接種于預(yù)先包被2%明膠的T25培養(yǎng)瓶中,。
9.細(xì)胞培養(yǎng)在37℃,、5%CO2培養(yǎng)箱中,24h后換液,,棄掉未貼壁細(xì)胞,。之后每2~3d換液1次,待細(xì)胞匯合時(shí)消化傳代,。
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