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PK-1人胰腺導管腺癌細胞

產品信息

細胞名稱： PK-1人胰腺導管腺癌細胞

種屬來源:   人

性別年齡： 男性

種屬來源: 胰腺

生長特性： 貼壁生長

細胞形態(tài):   不規(guī)則細胞樣

細胞規(guī)格:  1 X 10⁶cells/T25或1 mL凍存管

培養(yǎng)條件: RPMI1640 +10% fetal bovine serum

37 ℃, 5% CO2

凍存條件:  90% FBS + 10% DMSO

傳代方法：1:3傳代, 2-3天傳1代

細胞培養(yǎng)操作

干冰運輸：收到細胞后需立即轉入液氮保存,、或者-80°C冰箱短期凍存、或者直接復蘇

常溫運輸：收到細胞后,，請立即將細胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出,，并按照下方操作步驟進行培養(yǎng)傳代

細胞傳代：細胞密度達80% - 90%，即可進行傳代培養(yǎng)

培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟

對于貼壁培養(yǎng)的細胞,，寄送前,，我們會將培養(yǎng)基充滿整個培養(yǎng)瓶,，以減少產品運輸過程中貼壁細胞的脫落。

1. 收到細胞后,，請注意觀察是否有污染,。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染,。因為運輸過程中存在顛簸，且有些細胞對溫度變化也很敏感,，可能存在一些細胞脫落漂浮的情況,，這些細胞仍是活細胞，請勿丟棄,，可離心富集后傳代使用,。

2. 對于貼壁細胞，在生物安全柜環(huán)境中,，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中多余的培養(yǎng)基,，至剩余5-8mL 左右，隨后根據培養(yǎng)基選擇合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，擰松瓶蓋,。如果細胞已經長滿培養(yǎng)瓶，請立即傳代,。

3. 對于懸浮的細胞,，在生物安全柜環(huán)境中，轉移培養(yǎng)瓶中的細胞至離心管,，150 g 離心 5 分鐘,，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細胞,，轉移至新的培養(yǎng)瓶中,，隨后置于合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

凍存管細胞操作步驟

注意： 為保證細胞的高活率,，請收到產品后,，立即解凍培養(yǎng)。

1. 將凍存管置于37℃水浴中來回晃動,，迅速解凍,。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上,。解凍需迅速,，大約1分鐘。

2. 一旦凍存管中液體融化后,，立即取出,，采用酒精噴拭凍存管表面,。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成,。

3. 將凍存管中的液體轉移到含有5mL完培養(yǎng)基的離心管中,，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清,。

4. 用全培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉移到新的培養(yǎng)瓶中,。為保證細胞復蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37℃水浴預熱后使用,。

5. 將細胞置于含有合適CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

貼壁細胞傳代培養(yǎng)

1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS潤洗一次,。

2. 加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液,，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細胞從壁上脫落分離,。此過程大約需要3-5分鐘,。

3. 加入2mL全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打將細胞從培養(yǎng)瓶表面吹落,，并使細胞分散,。

4. 將細胞懸液收集到15mL離心管里，150 g 離心 5 分鐘,，用真空泵去除上清,。取適量的培養(yǎng)基將細胞重懸，轉移到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。

懸浮細胞傳代可參考以下方法：

一,、直接傳代法

   1、待懸浮細胞長滿至 80%～90%（細胞懸液變黃）,，即可傳代,；
   2、用吸管吸棄細胞懸液 1 / 2~1 / 3,；
   3,、加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng),。

二,、離心傳代法（在發(fā)現有細胞碎片的情況下）

   1、將細胞懸液轉移到離心管內,；
   2,、150 g 離心 5 min，棄去上層清液；
   3,、使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞,；
   4、吸管吸取適量細胞懸液,，裝入新的培養(yǎng)瓶,，再加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng),。

細胞凍存操作

1. 1000rpm離心5分鐘去掉上清,。加1 mL血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，   DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1 x 10⁶/mL,，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識,。

2. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80°C冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存,。

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