文章來源：procell
外泌體作為細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)，其高純度,、高回收率的分離對下游功能分析、組學(xué)檢測及疾病診斷至關(guān)重要,。然而,，傳統(tǒng)外泌體提取方法往往面臨設(shè)備要求高,、操作流程復(fù)雜等挑戰(zhàn)。為此，普諾賽®針對性開發(fā)了多種分離方案，以滿足不同樣品類型與研究需求。
在上期細(xì)胞學(xué)堂中,，我們梳理了常用的外泌體分離方法,，本期我們將進(jìn)一步聚焦普諾賽®推出的四款外泌體分離試劑盒,，詳細(xì)解析其核心原理,、操作流程、注意事項及優(yōu)勢,，助力您挑選最-適合的產(chǎn)品,。
微量外泌體分離試劑盒（磁珠法）
貨號：
P-CA-501
試劑盒組分：
Exosome Beads、
Solution A,、
Elution Buffer
原理概述
利用自主研發(fā)的均相液體磁珠（Exosome Beads），通過磁珠特異性結(jié)合外泌體而不吸附雜質(zhì),，以及磁性分離技術(shù),，達(dá)到高純度和高回收率的分離效果。
操作流程
1
樣品預(yù)處理：差速離心（300 g，5 min→2000 g,，10 min→14000 g,，30 min）逐步去除樣品中細(xì)胞、細(xì)胞碎片及大體積顆粒,；
2
富集外泌體：向去除了保護液的磁珠中加入預(yù)處理后的樣品,，置于搖床室溫旋轉(zhuǎn)孵育30 min；
3
洗滌：置于磁力架上,，靜置30s,，棄上清，并用Solution A洗滌,，重復(fù)2次,，保留磁珠；
4
分離外泌體：加入Elution Buffer后置于搖床室溫旋轉(zhuǎn)孵育30 min,；置于磁力架上,，靜置30s，轉(zhuǎn)移上清到新的離心管中,，該上清即為分離的外泌體,。
注意事項
在某些樣品中，磁珠結(jié)合外泌體時可能會結(jié)團,，但不影響分離效果,，無需處理；
完成分離后的外泌體不宜長時間在Elution Buffer中保存,。若長時間保存,，可使用超濾管將溶液置換為PBS。
優(yōu)勢
分離的外泌體純度高且完整性好,，適合分離微量或珍貴樣品中外泌體,；分離操作簡便，僅需常規(guī)磁力架,，無需特殊設(shè)備,，高通量，能同時處理多個樣本,，兼容自動化操作,。
通用外泌體分離試劑盒（SEC法）
貨號：
P-CA-502/P-CA-503
試劑盒組分：
Exosome Purification Column、
Column Adapter
注：P-CA-502和P-CA-503僅產(chǎn)品規(guī)格和樣品上樣量有區(qū)別,，其他操作是一致的。
原理概述
基于分子排阻色譜原理,，利用外泌體純化柱（Exosome Purification Column）中的多孔凝膠顆粒作為填料,，這些填料顆粒根據(jù)顆粒大小形成不同的孔道，使得在PBS緩沖液流動的過程中，將樣品中外泌體與其他不同尺寸的顆粒進(jìn)行分離,。
操作流程
1
樣品預(yù)處理：差速離心（300 g,，5 min→2000 g，10 min→14000 g,，30 min）逐步去除樣品中細(xì)胞,、細(xì)胞碎片及大體積顆粒；
2
純化柱預(yù)處理：將純化柱在室溫平衡30 min,，檢查并排除空氣,，PBS平衡純化柱；
3
外泌體分離：待樣品完-全進(jìn)入純化柱,，分批加入0.5 mL PBS,，并收集流穿液，其中4-8號管（P-CA-502）或8-12號管（P-CA-503）中收集的流穿液即為分離的外泌體,；
4
純化柱維護：先后加入PBS和20%乙醇清洗純化柱,，再將純化柱加滿20%乙醇密封，于4℃保存,。
注意事項
本操作中使用的PBS和20%乙醇建議現(xiàn)配現(xiàn)用,，同時經(jīng)0.2 μm濾膜過濾、超聲或真空脫氣,，避免造成純化柱出現(xiàn)大量氣泡,，影響分離效果；
純化柱使用前需充分平衡至室溫（18-25℃）,，溫度過低或過高,，都會影響外泌體分離效果；
純化柱中間不能有氣泡,，使用前后需認(rèn)真檢查,，避免影響外泌體分離效果；
純化柱可以反復(fù)利用,，但多次使用會影響純化效果,，建議重復(fù)使用不超過5次；
當(dāng)分離的外泌體進(jìn)行NGS或者其他組學(xué)分析時,，為避免交叉污染,，建議每個樣品使用一支新的純化柱。
優(yōu)勢
分離的外泌體純度高,、回收率高,；操作簡單，無需專業(yè)的純化設(shè)備,，可獲得無蛋白污染,、用于鑒定檢測和功能研究的高質(zhì)量外泌體,。
離心柱式外泌體分離試劑盒
貨號：
P-CA-504
試劑盒組分：
Spin Column 01、
Collection Tubes (2 mL),、
Solution A
原理概述
離心柱中裝填的介質(zhì)能無差別吸附雜質(zhì)而不結(jié)合外泌體,，利用離心力實現(xiàn)樣品中外泌體與雜質(zhì)的分離。此法不僅可快速分離外泌體,，還可去除游離的外泌體標(biāo)記染料,。
操作流程
1
樣品預(yù)處理：差速離心（300 g，5 min→2000 g,，10 min→14000 g,，30 min）逐步去除樣品中細(xì)胞、細(xì)胞碎片及大體積顆粒,；
2
離心柱預(yù)處理：棄去離心柱（Spin Column 01）上層的保護液體,，加入Solution A離心洗滌；
3
外泌體分離：將預(yù)處理后的樣品加入離心柱中,，離心獲得的洗脫液即為分離的外泌體,。
注意事項
單個離心柱最大上樣體積為500 μL，若樣品體積超過500 μL,，則建議試用50 kDa超濾管濃縮樣品至0.5 mL,，注意濃縮體積不超過20倍；
對高粘度樣品,，如血漿,、血清、胸腹水等樣本,，可用等體積去離子水稀釋再加入到離心柱中,；
對雜質(zhì)較多的樣品，如血漿,、血清,、胸腹水、牛奶等樣本,，建議用PBS稀釋10倍后,，經(jīng)過50 kDa超濾管濃縮10倍；然后加入剩余液體10倍體積的PBS,，超濾濃縮10倍后,，再用離心柱分離外泌體；
離心法分離時,，控制離心力在300-500×g,；若樣品粘度大，可適當(dāng)增加離心力,，以確保分離效果,。
優(yōu)勢
外泌體分離操作簡便,、高純度和高富集量，無需磁力架,、超速離心機等特殊設(shè)備；能去除游離的外泌體標(biāo)記染料,。
外泌體分離試劑盒（沉淀法）
貨號：
P-CA-505
試劑盒組分：
Exosome Precipitation Solution,、
Solution A
原理概述
通過添加特定的試劑（如Exosome Precipitation Solution），使樣品中的外泌體迅速聚集沉降,，再通過離心收集沉淀中的外泌體,。
操作流程
1
樣品預(yù)處理：差速離心（300 g，5 min→2000 g,，10 min→14000 g,，30 min）逐步去除樣品中細(xì)胞、細(xì)胞碎片及大體積顆粒,；
2
沉淀外泌體：血清/血漿樣品按照樣品:Solution A:Exosome Precipitation Solution=2:2:1的體積比混勻,；細(xì)胞培養(yǎng)上清/尿液樣品按照樣品:Exosome Precipitation Solution=4:1的體積比混勻；室溫孵育30 min或4℃孵育過夜,；
3
外泌體回收：高速離心,，吸棄上清，向沉淀中加入Solution A重懸沉淀,，再次離心收集上清,，即為分離的外泌體。
注意事項
注意樣品與各試劑的體積比,，嚴(yán)格按照推薦比例操作,；
細(xì)胞培養(yǎng)上清或尿液樣品體積過大，可以先進(jìn)行濃縮再進(jìn)行沉淀,；
操作要輕柔,，吸棄上清時避免吸到沉淀影響外泌體得率；
實驗時間允許情況下,，為保證外泌體分離的高回收率,，推薦4℃孵育過夜。
優(yōu)勢
適用樣品廣,，外泌體回收率高,、重復(fù)性好；無需特殊設(shè)備,，操作簡便快速,，能同時處理多個樣本。
希望這篇關(guān)于外泌體分離試劑盒的選用指南能幫助到您,！更多細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)干貨，請持續(xù)關(guān)注細(xì)胞學(xué)堂專欄~
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