培養(yǎng)BV2細胞時，最常遇到的問題就是細胞形態(tài)異常,，通常伴隨著細胞形狀改變,、拉絲較多等，對大家的實驗造成影響,。本期細胞學堂為大家整理了BV2細胞的培養(yǎng)方法,、常見問題及處理方法，幫助您快速上手開展實驗,。
細胞生長特性
① 半貼半懸：懸浮和貼壁細胞比例不固定,；
② 多形性：懸浮細胞為圓形，貼壁細胞既有圓形（飽滿圓潤,，邊緣亮）也有梭形（向兩端伸出黑色突起）,、多邊形。
BV2細胞顯微鏡圖
培養(yǎng)方法
BV2細胞的傳代
01
用移液器吸出細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液（含有懸浮細胞）,，轉(zhuǎn)移到無菌離心管A中；
02
用1 mL PBS潤洗細胞,，吸出PBS放入到上一步裝有培養(yǎng)液的離心管A中,；
03
培養(yǎng)瓶中加入1 mL胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使胰酶浸潤所有細胞,，放入37℃培養(yǎng)箱靜置消化（消化時間跟據(jù)細胞生長時間稍有不同,，消化時間一般為2~4 min，可以消化1 min后拿出來在顯微鏡下觀察,，若還未消化完-全就放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化,，直到顯微鏡下看到細胞明顯分離變圓，側(cè)立培養(yǎng)瓶細胞有滑落跡象,，可終止消化）,，全程不要拍打培養(yǎng)瓶；
04
培養(yǎng)瓶中加入3 mL含血清的培養(yǎng)基終止消化,，輕輕吹幾下將細胞吹落到液體中,，再輕吹5~10下使細胞均勻分散,，盡量在顯微鏡下呈單顆懸浮,；
05
將培養(yǎng)瓶中的細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管A中,，1200 rpm離心3 min；
06
棄上清,，加入2~3 mL新鮮培養(yǎng)基重懸沉淀,，按傳代比例分裝到新的培養(yǎng)瓶或者皿中，補足培養(yǎng)基,，最后輕吹幾下讓細胞分散均勻,。
注意事項
BV2細胞是半貼壁半懸浮細胞，懸浮細胞和貼壁細胞的比例不固定,，因此傳代的時候需要單獨收集懸浮和貼壁部分的細胞進行處理,。如果懸浮的細胞不到10%，貼壁的細胞密度有80%以上,，這個情況傳代的時候也可以不收集懸浮細胞,。
BV2細胞的凍存
凍存液推薦配比：
55%（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；
注意事項
細胞到貨穩(wěn)定培養(yǎng)2~3代后,，建議及時凍存保種,，推薦凍存密度2~3×106 cells/mL。由于細胞凍存成功率往往無法達到百分-之百,，一般建議邊傳代邊凍存,，每次凍存后需復蘇一支凍存管驗證細胞活率。
培養(yǎng)常見問題及處理方法
01
剛收到貨時,，細胞整體偏圓形較多,，而后續(xù)培養(yǎng)時梭形較多是怎么回事？
細胞形態(tài)會隨著密度的改變發(fā)生變化,。BV2細胞增殖較快,，到貨時由于運輸震蕩的原因，部分細胞會出現(xiàn)收縮,，此時細胞密度較高,，圓形相對較多；在后續(xù)培養(yǎng)中,，按照1:2~1:4傳代24 h時,，細胞主要以梭形為主；后續(xù)隨著細胞密度越來越高,，圓形細胞會逐漸變多,。
02
傳代培養(yǎng)時，發(fā)現(xiàn)細胞拉絲,、觸角較多,，如何調(diào)整,？
BV2細胞以較低密度傳代后，容易出現(xiàn)拉絲,、觸角較多的情況,。這種情況可以先收集培養(yǎng)基中懸浮或貼壁不牢的細胞于15 mL離心管中，貼壁的細胞用胰酶消化1 min左右后終止消化,，收集消化下來的的細胞（多觸角或者拉絲很長的細胞,，短時消化不容易消化下來，可以被篩掉）,，然后計數(shù)傳代,，培養(yǎng)一段時間后細胞狀態(tài)會有好轉(zhuǎn)。沒有消化下來的細胞也可以提高細胞密度傳代,，重復此步驟,，收集偏圓形的細胞培養(yǎng)。
03
培養(yǎng)過程梭型細胞比圓形細胞多,，梭型是不是細胞分化了,？
細胞受到LPS刺激后易分化，而常規(guī)培養(yǎng)過程是不會自發(fā)分化的,。關(guān)于哪種形態(tài)是分化,，并沒有統(tǒng)一的定論，有的文獻描述分化細胞是長梭型細胞增加,，有的文獻稱分化細胞偏圓形,，建議通過檢測相關(guān)的指標變化來判斷是否分化。
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