H9c2 (2-1)大鼠心肌細(xì)胞是一株由Kimes·B和Brandt·B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細(xì)胞株亞克隆得到的細(xì)胞株,;H9c2(2-1)細(xì)胞表現(xiàn)出許多骨骼肌的特性。H9c2(2-1)細(xì)胞中的成肌細(xì)胞能融合形成多核的肌管,,并對乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應(yīng),。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%,,H9c2(2-1)細(xì)胞融合發(fā)生得很快。
培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞時,,需要注意以下幾點(diǎn):
1,、鼠齡選擇:新生1~3d齡大鼠的心肌細(xì)胞在出生后3d內(nèi)具有部分的增殖能力,而成年大鼠的心肌細(xì)胞則為終末分化細(xì)胞,,不再具有分裂增殖能力,。因此,建議選擇1~3d齡的大鼠進(jìn)行原代培養(yǎng)以獲得更多活性心肌細(xì)胞,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇:溶解細(xì)胞過程要迅速,已溶解的凍存細(xì)胞不能在常溫下存放太久,,需要盡快離心去除DMSO,。
3、細(xì)胞凍存:推薦配比為55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO的凍存液,。在凍存時,,盡量吹散細(xì)胞并注意控制吹打力度。
4,、細(xì)胞培養(yǎng):培養(yǎng)條件為培養(yǎng)基:DMEM+10% FBS+1% P/S,,推薦傳代比例為1:2~1:4,換液頻率為2~3次/周,,培養(yǎng)箱溫度設(shè)定為37℃,,5% CO2。傳代操作包括:去掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基,,加入PBS進(jìn)行沖洗,,去上清后加入0.25%胰酶進(jìn)行潤洗,去上清后放入CO2培養(yǎng)箱消化2~4min,,加入培養(yǎng)基終止消化并吹打均勻,。
5、注意保持細(xì)胞匯合度在30%~90%,,避免細(xì)胞過度生長和分化。
6,、每一步操作都要輕柔小心,,以免對細(xì)胞造成損傷。
7,、選用優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基,,減少有害物質(zhì)對細(xì)胞的刺激。
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