間充質干細胞(MSC)是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞，存在于骨髓,、脂肪組織,、臍血及多種胎兒組織。在不同的誘導條件下,，可以向除造血干細胞以外的,，骨、軟骨,、肌組織,、皮膚、脂肪,、神經等多種組織分化,。間充質干細胞的易獲得、易擴增,、多潛能等特性使其在再生醫(yī)學中的應用前景十分光明,。
對于體外培養(yǎng)的間充質干細胞的鑒定，通?？梢愿鶕韵氯龡l標準進行驗證。
01
細胞形態(tài)學觀察
可運用組織塊貼壁法,、酶消化法以及兩種方法的結合分離出MSC,，通過傳代培養(yǎng)后，進行形態(tài)學觀察,。幾乎所有的MSC都是貼壁生長,，具有較強的貼壁能力。MSC多數呈纖維細胞樣生長,，少量呈梭形或不規(guī)則三角形,。
02
表面標志物鑒定
可采用流式細胞儀對MSC的細胞表型進行鑒定，MSC屬混雜細胞群,，其表面抗原也具有非專一性, 它可同時表達間質細胞,、內皮細胞和表皮細胞的表面標志，如粘附因子,、生長因子和細胞因子受體以及整合素家族等,。
MSC的細胞表面標志物鑒定標準為：CD105、CD73和CD90的陽性率≥90%,；而CD45,、CD34、CD14,、CD19和HLA-DR呈陰性,，陽性率≤5%,。（如下圖）
流式細胞儀檢測 hUC-MSC 的表面標志物
需要注意的是，陽性標記不具特異性,，并非每個細胞都同時表達CD105,、CD73和CD90。
03
多向分化潛能鑒定
MSC具有分化為脂肪細胞,、成骨細胞和軟骨細胞的能力,，可通過特異性染色鑒定體外成脂、成骨和成軟骨誘導后的分化能力,。
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成脂誘導分化鑒定
細胞成脂分化誘導2周左右,，于倒置顯微鏡下觀察，可見細胞質內出現油滴,，經油紅O染色后為紅色,。
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成骨誘導分化鑒定
細胞成骨分化誘導3周左右時，于倒置顯微鏡下觀察,，可見不透明區(qū)域,，經茜素紅染色后可見密集的紅色沉淀物呈結節(jié)狀。
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成軟骨誘導分化鑒定
細胞成軟骨分化誘導2周左右,，于倒置顯微鏡下觀察,，可見細胞經阿利新藍染色為淡藍色。
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參考文獻
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