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　　小鼠骨髓基質系統(tǒng)內存在的小鼠骨髓間充質干細胞是一種除造血干細胞以外的、具有多向分化潛能的干細胞，可以向骨,、軟骨,、肌組織、皮膚,、脂肪,、神經等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞,。那么它是如何培育的呢,？

　　
 

　　1、材料

　　

　　成年小鼠4只,、胎牛血清,、L-DMEM、胰蛋白酶,、PBS,、Percool細胞分離液、雙抗,、8%碳酸氫鈉溶液,。

　　

　　2、儀器

　　

　　倒置顯微鏡,、CO2恒溫培養(yǎng)箱,、超凈工作臺、生物顯微鏡,、低溫高速離心機,、無菌操作臺、血球計數(shù)板,、6孔培養(yǎng)板,。

　　

　　3、方法

　　

　　骨髓收集→Percoll密度梯度離心法分離純化骨髓間充質干細胞→貼壁培養(yǎng)→形態(tài)學觀察→原代培養(yǎng)細胞

　　

　　注：原代培養(yǎng)時胎牛血清比例可適當提升,，可以提高細胞成活率,。

　　

　　4、結果

　　

　?。?）骨髓間充質細胞的形態(tài)學觀察

　　

　　24h后就見有細胞貼壁,，多數(shù)細胞呈圓形。72h后半量換液去除未貼壁細胞,，此時貼壁的細胞為單個，形態(tài)大部分為圓形,。第一次換液后5~7天可見由幾十個到數(shù)百個細胞組成的集落,，細胞形態(tài)呈梭形、三角形,、星形,。原代培養(yǎng)10天左右,，細胞快速增殖，每個集落中的細胞不斷增殖呈長梭形放射狀排列,。培養(yǎng)2周左右,，每個小集落形成約數(shù)百至上千個細胞的大集落，集落交界處出現(xiàn)重疊,、融合,。

　　

　　（2）骨髓間充質細胞的生長曲線

　　

　　生長曲線表明BMSCs的增殖能力很強,，所測細胞在開始的前4天里生長緩慢處于潛伏適應期,，第5天開始迅速增長進入對數(shù)生長期，到第9天細胞數(shù)輕度上升,，第10天達到頂點,，生長速度減緩進入平臺期。