雞卵泡顆粒細胞分離自PMSG誘導后3天的雞卵巢組織,顆粒細胞是卵巢的主要功能細胞,,其增殖與分化直接影響著卵泡的生長啟動,、發(fā)育、排卵,、黃體形成以及甾體激素分泌等卵巢功能活動,。細胞形狀呈圓形或橢圓形。細胞采用機械分離法制備而來,,細胞總量約為5×105個/瓶,,細胞純度可達80%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。初級卵泡的顆粒細胞為單層;次級卵泡的顆粒細胞增至復層,;成熟卵泡的顆粒細胞展開又變?yōu)閱螌?。顆粒細胞的胞核大而圓,著色深,,細胞的游離面有許多細長突起伸入放射帶的凹陷部,。

雞卵泡顆粒細胞分離自雞卵泡組織;成熟卵泡是卵巢的組織結構成分之一,,卵泡腔很大,,卵丘很明顯。卵泡內膜細胞緊靠卵泡顆粒層,,與顆粒層細胞之間有一層基膜相隔,,內膜細胞呈多邊形,胞質清亮,,胞核圓形,,細胞間可見許多毛細血管,外膜細胞位于較外層,,多呈梭形,,與周圍結締組織分界不明顯。卵泡(follicle)中卵母細胞四周有一層菱形或扁平細胞圍繞,,在卵泡開始發(fā)育,、卵細胞成長的同時,周圍的菱形細胞變?yōu)榱⒎叫?,并由單層增生成復層,,因其細胞漿內含有顆粒,故稱為顆粒細胞,。
雞卵泡顆粒細胞培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作,。傳代培養(yǎng)過程中,,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。
凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),,如無法立刻進行復蘇操作,,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸,;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁,。
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