小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞是怎么獲得的,？一般采用長骨解剖和骨髓分離程序，總體目標是快速,、系統(tǒng)地取出長骨,，并收集骨髓細胞進行進一步的實驗分析。這種方法有助于回答有關(guān)骨髓生物學,、腫瘤轉(zhuǎn)移和免疫學的關(guān)鍵問題,。這項技術(shù)的主要優(yōu)點是解剖過程快速、標準化,，骨髓分離程序相當無菌,，首先處死小鼠并將小鼠置于仰臥位。
然后將小鼠的四個爪墊固定在踝關(guān)節(jié)下方,，用70%乙醇噴灑小鼠,，*沖洗腿部。下一步,，在臀部正上方的下腹部中線右側(cè)做一個小切口,，將切口向下延伸到腿部,，穿過踝關(guān)節(jié)。拉回皮膚,。
然后切開固定在股骨近端的股四頭肌,，露出大腿骨的前側(cè)，并用銷釘將肌肉從腿部固定出來,，與木板成45度角,。用剪刀抵住股骨后側(cè)，從膝關(guān)節(jié)上剪下腘繩肌,。然后將固定在股骨近端的皮膚和腘繩肌向后拉,，露出骨的后側(cè)，并將腘繩肌從腿部固定出來,，使固定銷成45度角,。
用鑷子抓住股骨遠端，剛好在膝關(guān)節(jié)上方,。然后引導股骨干兩側(cè)的剪刀刀片朝向髖關(guān)節(jié),。到達股骨頭后，扭轉(zhuǎn)剪刀,，將頂部刀片直接移到股骨頭上方,，使股骨脫臼。
用鑷子抓住股骨干的頂部,，從股骨頭上切下軟組織,，將股骨從髖臼中取出。然后將整個腿骨,，包括股骨,、膝蓋和脛骨向上拉離身體，小心地切斷連接腿部與皮膚的結(jié)締組織和肌肉,。當所有的結(jié)締組織都被移除后,，拉伸踝關(guān)節(jié)并扭轉(zhuǎn)剪刀，使脛骨脫臼,。
抓住脛骨遠端,，注意不要切斷肌腱，將脛骨向上拉離身體和釘板,。然后去除任何殘留在膝蓋長骨上的結(jié)締組織,，以及任何附加在股骨和脛骨上的肌肉或結(jié)締組織。抓住股骨,，使髕骨朝外,，股骨頭朝下。
過度伸展膝關(guān)節(jié),，扭動剪刀,，使脛骨與股骨脫臼。然后移除所有連接股骨和脛骨的結(jié)締組織,。下一步,，抓住股骨，使前側(cè)朝外,，股骨頭朝下,，然后將剪刀沿股骨干向上引導至髁部。
輕輕地來回旋轉(zhuǎn)剪刀,，去除髁突,、髕骨和骨骺，露出干骺端,。然后,，用鑷子、剪刀和低塵擦拭紙去除任何附加在股骨上的肌肉或結(jié)締組織,。下一步,，抓住脛骨，前側(cè)朝外,，踝端朝下,。
如果脛骨骨骺完好無損，將剪刀沿脛骨軸向上引至髁突處,，輕輕來回轉(zhuǎn)動剪刀,，將髁突和骨骺切除，露出脛骨干骺端,。然后移除任何附加在脛骨上的肌肉或結(jié)締組織,，如剛才所示。為了獲取骨髓,，首先用一根18號的針穿過一根0.5毫升的微量離心管的底部,。
然后把長骨放進管子里，膝蓋朝下,，蓋上蓋子,。將0.5毫升的微型離心管放入1.5毫升的微型離心管中，并在大于或等于10000倍g的微型離心管中離心15秒,。通過目視檢查確認骨髓已經(jīng)從骨頭中旋出,。
1、使用10mL注射器,，抽出小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,。
2、轉(zhuǎn)移至50mL錐形管中，用FSB將體積增加至50mL,。
3,、將50uL樣品轉(zhuǎn)移到eppendorf試管中，并進行細胞計數(shù),。
4,、以1200轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)細胞8分鐘。
5,、從離心細胞中倒出上清液,，轉(zhuǎn)入干細胞*培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。
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