脂肪檢測—索式提取器提取法詳解
脂肪檢測方法可用索式提取法(經(jīng)典方法)
原理
樣品經(jīng)前處理后,,放入圓筒濾紙內(nèi),,將濾紙筒置于索式提取管中,,利用YM或石油醚在水浴中加熱回流,,使樣品中的脂肪進入溶劑中,,回收溶劑后所得到的殘留物,,即為脂肪(粗脂肪),。
采用這種方法測出游離態(tài)脂,此外還含有磷脂,、色素,、蠟狀物、揮發(fā)油,、糖脂等物質(zhì),,所以用索氏提取法測得的脂肪為粗脂肪,。
適用范圍與特點
索氏提取法適用于脂類含量較高,結(jié)合態(tài)的脂類含量較少,,能烘干磨細(xì),,不宜吸濕結(jié)塊的樣品的測定。此法只能測定游離態(tài)脂肪,,而結(jié)合態(tài)脂肪無法測出,,要想測出結(jié)合態(tài)脂肪需在一定條件下水解后變成為游離態(tài)的脂肪方能測出。
另外此法是經(jīng)典方法,,對大多數(shù)樣品結(jié)果比較可靠,,但需要周期長,溶劑量大,。
濾紙筒的制備
將濾紙剪成長方形8×375px ,,卷成圓筒,直徑為150px,,將圓筒底部封好,,最好放一些脫脂棉,避免向外漏樣,。
稱取樣品
將樣品烘干磨細(xì),,稱取一定量與紙筒封好上口,最好用測定水的樣品,。
索式提取器的準(zhǔn)備
索氏提取器由三部分組成,,回流冷凝管、提取管,、提脂瓶組成,。提脂瓶在使用前需烘干并稱至恒重。其它要干燥,。
抽提
將裝好樣的紙筒放入抽提管 ,, 倒入YM,YM的量從提取管加入,,加入的量為提取瓶體積的2/3 接上冷凝裝置,,在恒溫水浴中抽提,水浴溫度大約為55℃左右,,可用濾紙檢驗,,理論值抽提6-8小時,實際值3-4小時,,但也根據(jù)樣品性質(zhì)來決定,。
回收YM
當(dāng)YM在提取管內(nèi)即將虹吸時立即取下提取管,將其下口放到Y(jié)M回收瓶內(nèi),使之傾斜,,然后將提取瓶放到100-150℃烘箱烘至恒重,。
計算
脂肪%= (W2-W1)/W x 100
W2——瓶和樣品重(g)
W1——瓶子重量(g)
W——樣品重量(g)
或:脂肪%=(抽提后濾紙與樣品重量—抽提前濾紙重量)/樣品重量 × 100
濾紙筒應(yīng)事先放入燒杯與100-105℃烘箱烘至恒重。
索式提取法注意事項
(1)樣品應(yīng)干燥后研細(xì),,裝樣品的濾紙筒一定要緊密,不能往外漏樣品,,否則重做,。
(2)放入濾紙筒的高度不能超過回流彎管,否則YM不易穿透樣品,,使脂肪不能全部提出,,造成誤差。
(3) 碰到含多糖及糊精的樣品要先以冷水處理,,等其干燥后連同濾紙一起放入提取器內(nèi),。
(4) 提取時水浴溫度不能過高,一般使YM剛開始沸騰即可(約45℃左右),,回流速度以8-12次/時為宜,。
(5) 所用YM必需是無水YM,如含有水分則可能將樣品中的糖以及無機物抽出,,造成誤差,。
(6) 若用干樣品測定脂肪,可按下式計算原來樣品脂肪的含量
脂肪(%)= (W1-W2)(100-A) / W
A— 100克樣品中水分的含量(g)
(7) 冷凝管上端最好連接一個氯化鈣干燥管,,這樣不僅可以防止空氣中水分進入,,而且還可以避免YM揮發(fā)在空氣中。這樣可防止實驗室微小環(huán)境空氣的污染,,如無此裝置,,塞一團干脫脂棉球亦可。
(8)如果沒有無水YM可以自己制備,,制備方法如下:在100mlYM中,,加入無水石膏50克,振搖數(shù)次,,靜止10小時以上,,蒸餾,收集35℃以下的蒸餾液,,即可應(yīng)用,。
(9)將提取瓶放在烘箱內(nèi)干燥時,瓶口向一側(cè)傾斜45度防止揮發(fā)物YM易與空氣形成對流,,這樣干燥迅速,。
(10)如果沒有YM或無水乙醇時,可以用石油醚提取,石油醚沸點30-60℃為好,。
(11)使用揮發(fā)YM或石油醚時,,切忌直接用火源加熱,應(yīng)用電熱套,、電水浴,、電燈泡等。
(12) 這里恒重的概念有區(qū)別,,它表示最初達(dá)到的重量,,即溶劑和水分*揮發(fā)時的恒重,此后若在繼續(xù)加熱,,則因油脂氧化等原因會導(dǎo)致重量增加,。
(13) 在干燥器中的冷卻時間一般要一致。