mRNA生物制品質(zhì)量控制家族成員全新亮相

時間：2023/10/8閱讀：238

mRNA藥物是通過將編碼抗原蛋白的mRNA接種到人體,，利用人體細胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)進行表達合成抗原蛋白,，通過抗原蛋白誘導和激活機體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫反應,，從而達到預防和治療疾病的目的,。

由于其具有較低的感染和突變風險,，能夠同時誘導產(chǎn)生體液免疫和細胞免疫，免疫效能好,，研發(fā)和生產(chǎn)周期短,，容易實現(xiàn)量產(chǎn)等特點，目前被廣泛用于傳染性疾病,、腫瘤及罕見病藥物的研發(fā),。

通過酶促體外轉(zhuǎn)錄法制備大量mRNA的工藝已經(jīng)成熟，其中規(guī)?；a(chǎn)過程中主要涉及的工具酶有T7 RNA Polymerase,、DNase Ⅰ、RNase Inhibitor,、無機焦磷酸酶等,，這些酶的靈活使用極大的方便了生產(chǎn)流程，加速科學家們研究進展,。

mRNA規(guī)?；a(chǎn)中的工具酶

T7 RNA Polymerase

T7 RNA聚合酶是由T7噬菌體DNA編碼的，一種DNA依賴性的RNA聚合酶,，具有高度啟動子專一性,，可催化以T7啟動子序列為起點 5’→ 3’方向的RNA合成，在mRNA藥物研發(fā)中常以其催化目的基因的體外合成,，轉(zhuǎn)錄效率和產(chǎn)量高,，市面上由其催化的1μg DNA模板可轉(zhuǎn)錄出150-200μg的RNA。

DNase I

脫氧核糖核酸酶I，是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產(chǎn)生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內(nèi)切酶,，可以用于各種RNA樣品的處理,，消化由T7 RNA聚合酶催化的體外轉(zhuǎn)錄后的DNA模板，65℃加熱10分鐘可使DNaseI失活,。

RNase Inhibitor

RNase（Ribonuclease,，核糖核酸酶）是一類能夠催化RNA降解為小分子RNA的核酸酶，廣泛存在于真核,、原核生物的所有細胞和組織中,，通常有強活性，RNA樣本中微量的RNase污染足以導致其降解,。為了減少RNA的損失,，適當添加RNase抑制劑（RNase inhibitor）是有必要的。

RNase抑制劑是人的胎盤中存在的一種特異性核糖核酸酶(RNase)抑制劑,，能夠特異地與RNase以非共價鍵結合形成復合體從而使RNase失活,。

無機焦磷酸酶

多種代謝反應會產(chǎn)生無機焦磷酸,，Pyrophosphatas無機焦磷酸酶（PPase）可水解無機焦磷酸鹽,，可以避免無機焦磷酸對反應的抑制，并且提供熱力學動力促使反應向正向進行,，從而常用于RNA體外轉(zhuǎn)錄,、DNA復制和擴增如HDA或LAMP等溫擴增等。

尤其在工業(yè)化生產(chǎn)mRNA疫苗的時候會產(chǎn)生大量的無機焦磷酸鹽,，為了保證mRNA疫苗高效生產(chǎn),，可以添加無機焦磷酸酶，解除生成的無機焦磷酸鹽對反應體系的抑制,。

dsRNA

添加相關工具酶還會帶來其他影響,，例如使用 T7 RNA 聚合酶合成RNA的技術目前已經(jīng)很成熟，但之前的研究已經(jīng)確定了體外合成過程中某些副產(chǎn)物的存在,，這些副產(chǎn)物會觸發(fā)細胞免疫反應,，包括雙鏈 RNA (dsRNA)，這已被證明成為免疫通路的主要觸發(fā),。

檢測mRNA生物制品中殘留的必要

大多數(shù)工具酶的使用能幫助我們獲得大量的RNA,，但工具酶本身對于藥物成品來說亦是一種雜質(zhì)，這些雜質(zhì)與mRNA一起通過LNP包封進入細胞釋放后,，極有可能產(chǎn)生高強度的免疫原性從而連帶引發(fā)mRNA的降解,。以及產(chǎn)生的雙鏈RNA (dsRNA)雜質(zhì)具有潛在的免疫原性，對患者有害,。因此,，mRNA相關制品需要測定和控制工具酶和dsRNA的含量。

相關法規(guī)要求與檢測方法

——mRNA類的質(zhì)量標準可以納入外觀、pH值,、含量,、鑒別、序列分析,、mRNA完整性,、加帽率、poly（ A）長度及分布,、生物學活性,、無菌檢測、細菌內(nèi)毒素,、雙鏈 RNA殘留,、溶劑殘留等檢測項目。

體外基因修飾系統(tǒng)藥學研究與評價技術知道原則（試行）

--2022年05月

——mRNA等通過體外轉(zhuǎn)錄方式制備的核酸產(chǎn)品,，可通過對原材料,、轉(zhuǎn)錄模板和轉(zhuǎn)錄條件的研究，控制轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的質(zhì)量,。轉(zhuǎn)錄用的重要原材料,，如核苷酸、修飾核苷酸,、 5’-帽或類似物,、工具酶（如轉(zhuǎn)錄酶等）等應進行適當?shù)馁|(zhì)量控制，可關注其純度和雜質(zhì),，轉(zhuǎn)錄酶還需關注其保真度等,。

轉(zhuǎn)錄模板的制備應能確保模板的序列準確性和純度，減少雜質(zhì)殘留,。體外轉(zhuǎn)錄條件應經(jīng)過充分的研究,，提高轉(zhuǎn)錄序列的準確性、均一性和完整性,，減少副反應產(chǎn)物,，如不完整 RNA、雙鏈RNA,、截短RNA,、長鏈RNA等的形成。

體內(nèi)基因修飾系統(tǒng)藥學研究與評價技術指導原則（試行）

--2022年05月

CDE發(fā)布的指導原則《病毒預防用mRNA疫苗藥學研究技術指導原則（試行）》以及美國藥典（USP）發(fā)布的《mRNA疫苗質(zhì)量分析方法》的指南草案中（見下圖）指出:需要對整個工藝進行質(zhì)量控制,，保證質(zhì)量有效,、安全可控。

其指導原則中還規(guī)定,，需要對其生產(chǎn)工藝相關雜質(zhì)進行檢測,，對主要雜質(zhì)進行監(jiān)測與分析，需要更強大的評估方法來確保最終產(chǎn)品的質(zhì)量和安全。其中對T7 RNA和dsRNA的殘留進行了明確規(guī)定,。

疫苗行業(yè)

美國藥典(USP)發(fā)布的《mRNA疫苗質(zhì)量分析方法》指南草案

由于mRNA技術的應用相對較新,，在藥物研發(fā)和制造過程中指導mRNA質(zhì)量研究與控制方面的監(jiān)管指南和行業(yè)標準仍在不斷發(fā)展。

BlueKit產(chǎn)品信息

微信截圖_20231008165434.png

廣州東銳科技有限公司現(xiàn)為譜新生物代理商,，歡迎來詢,！

mRNA生物制品質(zhì)量控制家族成員全新亮相

會員登錄

收藏該商鋪

提示