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如何正確的選擇搖床振幅,?

時間:2022/4/14閱讀:950
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細胞培養(yǎng)作為生物實驗的基礎(chǔ)操作,,在研究生的日常中占著相當大的分量。最近實驗室新來的小師妹,,就因為細胞培養(yǎng)的問題愁容滿面,。


 

師兄,為什么我培養(yǎng)的細胞生長速度都比較緩慢,,存活率不高,,這樣下去什么時候才能做完實驗呀?
沒有污染的細胞速度生長緩慢,,除了受到溫度的影響外,,還受氧氣傳遞效率的影響。師妹你先檢查一下是不是因為振蕩培養(yǎng)箱的實際溫度沒有達到設(shè)定的溫度,箱體內(nèi)溫度均一度不夠?qū)е碌??其次你再看看振蕩培養(yǎng)箱的轉(zhuǎn)速有沒有問題,?
謝謝師兄,那我再去看看,。

 

很多同學看到這里,,可能會有很多疑惑,為什么振幅和轉(zhuǎn)速這么重要,,對細胞培養(yǎng)影響這么大呢,?

 

其實這兩個參數(shù)影響的是氧氣傳遞速度。那他們之間具體有什么關(guān)聯(lián),,我們又該如何正確的去選擇合適的振蕩培養(yǎng)箱呢,?請繼續(xù)往下看。

 

 
 
搖床的振幅

搖床的振幅指托盤在做圓周運動時候的直徑,,有時候我們也叫“振蕩直徑"或“軌道直徑",,符號:?。作為標準,,知楚提供振幅為26mm和50mm的搖床,,同時可為客戶提供其他尺寸振幅的定制搖床。

 
 
氧氣傳遞效率(OTR)

氧氣傳遞效率是指,,氧氣從大氣中傳入到液體中的效率,。 OTR數(shù)值越高,氧傳遞效率越高,。

 

這兩個因素都會影響培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基的混合,。 混合效果越好,氧傳遞速率(OTR)就越好,。遵循這些指導原則,,可以選擇適合的振幅和轉(zhuǎn)速。

 

一般來說,,選擇25mm或者26mm振幅可以作為萬能振幅應(yīng)用于所有培養(yǎng),。在一些應(yīng)用中,如果對氧傳遞/細胞生長有限制,,可能會選擇一些其它的振幅,。

 
 

振幅和轉(zhuǎn)速

振幅和轉(zhuǎn)速都會對氧傳遞造成影響。如果在轉(zhuǎn)速很低(比如100rpm)的細胞培養(yǎng)中,,振幅的不同對氧傳遞幾乎沒有明顯影響,。

 

要達到較高的氧傳遞效果,首先是盡可能的提高轉(zhuǎn)速,,托盤會適當?shù)钠胶廪D(zhuǎn)速,。但并不是所有培養(yǎng)物都能夠在高速振蕩下良好生長,,一些對剪切力敏感的培養(yǎng)物,高轉(zhuǎn)速會導致培養(yǎng)物死亡,。

 
 

其他因素的影響

裝液量方面:錐形燒瓶的裝液量為不超過總體積的三分之一,。如果要達到最大氧傳遞,裝液量不能超過10%,。不要將裝液量達到50%。

擾流板方面:在各類型的培養(yǎng)中,,擾流板都有效提高氧傳遞,。

 

有些廠家推薦使用“高產(chǎn)量"培養(yǎng)瓶。這種瓶的擾流板會增加液體摩擦力,,搖床可能會達不到最大設(shè)定轉(zhuǎn)速,。

 
 

振幅和轉(zhuǎn)速的關(guān)聯(lián)關(guān)系

搖瓶中的離心力可以通過下面公式計算

FC=rpm2 ×振幅

 

離心力和振幅間存在線性關(guān)系:

如果使用25mm振幅 到 50mm振幅(轉(zhuǎn)速相同),離心力增加了2倍,。

 

離心力和轉(zhuǎn)速存在平方關(guān)系:

如果轉(zhuǎn)速提高到2倍(振幅相同),離心力提高4倍;如果轉(zhuǎn)速提高到3倍,,離心力則提高9倍,;

 

如果用振幅25mm,在給定的速度下,,進行培養(yǎng),;如果希望用振幅50mm,達到相同的離心力,,轉(zhuǎn)速應(yīng)該用1/2的平方根計算,,因此您應(yīng)該使用70%的轉(zhuǎn)速,達到近似相同的培養(yǎng)條件,。

 

上述只是理論上的計算離心力的方法?,F(xiàn)實應(yīng)用中會有其他影響因素。這種計算方法可以得到近似值,,供操作參考,。

 

細菌,酵母和真菌培養(yǎng):

若搖瓶中的氧氣傳遞效率比生物反應(yīng)器低得多,,多數(shù)情況下氧傳遞可能是受搖瓶培養(yǎng)的限制,,振幅則與錐形培養(yǎng)瓶的大小相關(guān)。如26mm振幅應(yīng)用于從25毫升到2升的錐形培養(yǎng)瓶,;50mm振幅應(yīng)用于2升至5升的錐形培養(yǎng)瓶

 

細胞培養(yǎng):

哺乳動物細胞培養(yǎng)對氧氣的需求相對較低,,較低的功率輸入即可。對于250毫升搖瓶,,在較為寬廣的振幅和振速范圍(20-60mm振幅,;100-300rpm)都可以提供足夠的氧氣傳遞,;如果直徑較大的燒瓶(Fernbach燒瓶)推薦使用50毫米振幅;使用一次性培養(yǎng)袋,,推薦使用50mm振幅,。

 

微孔板和深孔板:

有兩種不同的方法可以獲得最大的氧傳遞速率。若50mm振幅,,轉(zhuǎn)速不低于250rpm,;使用3mm振幅,轉(zhuǎn)速在800-1000rpm,。

如果你的小師妹也遇到了細胞培養(yǎng)方面的難題,,請快來聯(lián)系東銳科技吧。



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