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WP2uvrA大腸桿菌 (Ames試驗)
遺傳毒性試驗在食品,、藥物,、化妝品、環(huán)境等各領域安全檢測及評價上得到了廣泛應用,。其中比較常見的是Ames試驗,,也是經(jīng)典的測試化學物或藥物致突變實驗,該法測定主要在培養(yǎng)皿中進行,,具有簡單,、快速、精確而又靈敏的特點,,被世界各國廣泛采用,。為了使以上試驗條件更接近于哺乳動物的代謝情況,在測試系統(tǒng)中加入哺乳動物微粒體酶(S9),,可彌補體外試驗缺乏代謝活化系統(tǒng)之不足,。
齊氏生物提供的菌株(TA97a、TA98,、TA100,、TA102、TA1535)和 WP2uvrA大腸桿菌 (Ames試驗), 經(jīng)過鑒定,,菌株特性與活菌數(shù)量符合Ames試驗國家標準,,并以甘油菌的形式提供,融化后可直接使用,。 為了保證試驗效果,,建議搭配齊氏生物研發(fā)的S9代謝活化系統(tǒng)一起使用。
保存條件:干冰運輸,,-80℃保存,。
注意事項:
在使用過程中要特別注意避免培養(yǎng)基污染菌株。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,,不得用于臨床診斷或治療,,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi),。
為了您的健康和安全,,請穿實驗服并戴好一次性手套進行無菌操作。
延伸閱讀
Ames鼠傷寒沙門氏桿菌回復突變試驗-ISO 10993-3,GB/T 16886.3,YY/T 0127.10
Ames試驗全稱鼠傷寒沙門氏桿菌回復突變試驗,。
實驗目的和原料:
鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)的組氨酸營養(yǎng)缺陷型(his-)菌株,,在含微量組氨酸的培養(yǎng)基中,,除極少數(shù)自發(fā)回復突變的細胞外,一般只能分裂幾次,,形成在顯微鏡下才能見到的微菌落,。受誘變劑作用后,大量細胞發(fā)生回復突變,,自行合成組氨酸,,發(fā)育成肉眼可見的菌落。某些化學物質(zhì)需經(jīng)代謝活化才有致變作用,,在測試系統(tǒng)中加入哺乳動物微粒體酶,,可彌補體外試驗缺乏代謝活化系統(tǒng)之不足。
菌株鑒定
用于測試的菌株,,需經(jīng)基因型和生物學性狀鑒定,,符合要求才能投入使用。
鑒定前先進行增菌培養(yǎng),。為鑒定結(jié)果可靠,,需同時培養(yǎng)野生型TV菌株,作為測試菌基因型之對照,。增菌培養(yǎng)用牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基,,接種后于37℃,100r/min振蕩培養(yǎng)12h左右,,細菌生長相為對數(shù)期末,,含菌數(shù)應為1×109個/ml~2×109個/ml。
鑒定項目:
(1)脂多糖屏障丟失(rfa)用接種環(huán)或一端撓起的接種針以無菌操作術取各菌株的增菌培養(yǎng)液,,在營養(yǎng)瓊脂平板上分別劃平行線,,然后用滅菌尖頭鑷夾取滅菌濾紙條,浸濕結(jié)晶紫溶液,,貼放在平板上與各接種平行線垂直相交,。蓋好皿蓋后倒置于37t溫箱,培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果,。
(2)R因子劃線接種,,貼放濾紙條及培養(yǎng)等均同上,唯濾紙條浸濕的藥液不同,,為氨芐青霉素鈉溶液。TA102除pKM101外,,還有pAQ1,,載有抗四環(huán)素的基因,故另用濾紙條浸濕四環(huán)素溶液后貼放于劃線接種的平板上,。
(3)紫外線損傷修復缺陷(△uvrB)在營養(yǎng)瓊脂平板上按上述方法劃線接種后,,一半接種線用黑玻璃遮蓋,另一半暴露于紫外光下8sec,然后蓋好皿蓋并用黑紙包裹平皿,,防止可見光修復作用,。培養(yǎng)同上。
(4)自發(fā)回變預先制備底平板,;向滅菌并在水浴內(nèi)保溫45℃的上層軟瓊脂中注入0.1ml菌液,;混勻后傾于底平板上并鋪平。平皿倒置于37℃溫箱培養(yǎng)48h,。
(5)回變特性——診斷性試驗上層軟瓊脂中除菌液外,,還注入已知陽性物之溶液,需活化系統(tǒng)者并加入S9mix,,余同上,。
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