菌株鑒定

用于測試的菌株，需經(jīng)基因型和生物學性狀鑒定,，符合要求才能投入使用。

鑒定前先進行增菌培養(yǎng)。為鑒定結(jié)果可靠,，需同時培養(yǎng)野生型TV菌株，作為測試菌基因型之對照,。增菌培養(yǎng)用牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接種后于37℃,，100r/min振蕩培養(yǎng)12h左右,，細菌生長相為對數(shù)期末,，含菌數(shù)應為1×109個/ml～2×109個/ml,。

鑒定項目：

（1）脂多糖屏障丟失（rfa）用接種環(huán)或一端撓起的接種針以無菌操作術(shù)取各菌株的增菌培養(yǎng)液，在營養(yǎng)瓊脂平板上分別劃平行線,，然后用滅菌尖頭鑷夾取滅菌濾紙條,，浸濕結(jié)晶紫溶液，貼放在平板上與各接種平行線垂直相交,。蓋好皿蓋后倒置于37t溫箱，培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果,。

（2）R因子劃線接種,，貼放濾紙條及培養(yǎng)等均同上，唯濾紙條浸濕的藥液不同,，為氨芐青霉素鈉溶液,。TA102除pKM101外,，還有pAQ1,，載有抗四環(huán)素的基因,，故另用濾紙條浸濕四環(huán)素溶液后貼放于劃線接種的平板上。

（3）紫外線損傷修復缺陷（△uvrB）在營養(yǎng)瓊脂平板上按上述方法劃線接種后，一半接種線用黑玻璃遮蓋,，另一半暴露于紫外光下8sec,，然后蓋好皿蓋并用黑紙包裹平皿,，防止可見光修復作用,。培養(yǎng)同上,。

（4）自發(fā)回變預先制備底平板；向滅菌并在水浴內(nèi)保溫45℃的上層軟瓊脂中注入0.1ml菌液,；混勻后傾于底平板上并鋪平,。平皿倒置于37℃溫箱培養(yǎng)48h,。

（5）回變特性——診斷性試驗上層軟瓊脂中除菌液外，還注入已知陽性物之溶液,，需活化系統(tǒng)者并加入S9mix，余同上,。