??SMC兔主動脈平滑肌細胞

細胞介紹
該細胞來源于兔主動脈,，常用作動脈粥樣硬化的研究,。
 
細胞特性
1） 來源：兔主動脈
2） 形態(tài)：多角,，貼壁生長
3） 含量：>1x10^6 個/mL
4） 污染：支原體,、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
 
SMC兔主動脈平滑肌細胞

運輸和保存

（1）使用含有優(yōu)質胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞,。

（2）收到細胞后,，可在1000RPM，常溫條件下,，離心5min后,，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉移至250px培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。
 
細胞用途：僅供科研使用,。
                       
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號41500034, 添加NaHCO3 2.2g/L)，90%,；優(yōu)質胎牛血清,，10%,，添加1% PS。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。

二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。??