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SMC兔主動脈平滑肌細胞
細胞介紹
該細胞來源于兔主動脈,,常用作動脈粥樣硬化的研究,。
細胞特性
1) 來源:兔主動脈
2) 形態(tài):多角,,貼壁生長
3) 含量:>1x10^6 個/mL
4) 污染:支原體,、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝
SMC兔主動脈平滑肌細胞
運輸和保存
(1)使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞,。
(2)收到細胞后,可在1000RPM,常溫條件下,,離心5min后,,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至250px培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。
細胞用途:僅供科研使用,。
細胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號41500034, 添加NaHCO3 2.2g/L),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,添加1% PS,。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3) 細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進行凍存。