SW620/5-FU人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株

細(xì)胞介紹

SW620是從一個(gè)51歲男性白人組織中分離得到,。 由A.Leibovitz等從一個(gè)淋巴結(jié)建株,。細(xì)胞系主要由無(wú)絨毛的小園球細(xì)胞和雙極細(xì)胞組成,。它僅合成少量癌胚抗原（CEA）且在裸鼠中有高度的致瘤性,。

注：本培養(yǎng)基是不直接添加氟尿嘧啶藥物的。

細(xì)胞特性

（1）來(lái)源：結(jié)直腸腺癌,，來(lái)自轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)

（2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣  貼壁生長(zhǎng)

（3）含量：>1×106  細(xì)胞數(shù)

（4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

（5）用途：僅供科研使用

SW620/5-FU人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們,。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收,。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。      

1,、細(xì)胞培養(yǎng)條件及相關(guān)試劑的配制

（1）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，100%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

（2）準(zhǔn)備L15培養(yǎng)基（推薦0009）：優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗，1% ,，可添加5-Fu濃度為：400~1065uM,；

注意：

1. 細(xì)胞在傳代和剛復(fù)蘇時(shí)較為脆弱，中止液須為不含5-Fu的*培養(yǎng)基,，且在細(xì)胞未貼壁期間和貼壁前期需用不含5-Fu的*培養(yǎng)基,，待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)再根據(jù)需要濃度添加5-Fu。

2.若細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為緩慢時(shí),，可適當(dāng)降低5-Fu的濃度,，或使用不含5-Fu的*培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的5-Fu濃度,。

（3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二．細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化,。

注意：如還有部分細(xì)胞未消化下來(lái)，可采用分步消化：

a. 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的15mL離心管,，加入2mL含10%FBS的*培養(yǎng)基,；

b.將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打）；

c.向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入1mL 0.25%胰蛋白酶繼續(xù)消化2min左右,，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫落后加入2mL含10%FBS的*培養(yǎng)基中和，中和后的細(xì)胞懸液移入①中的離心管內(nèi),。 

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。