一,、組織塊直接培養(yǎng)法
1、取材,，用 Hank's 液洗滌三次,，并剔除脂肪,，結締組織，血液等雜物,。
2、用手術剪將組織剪切成 1mm3左右的小塊,，再用 Hank's 液洗三次。
3、將組織塊轉移至培養(yǎng)瓶,，并貼附于瓶底面,。
4,、輕輕將培養(yǎng)瓶翻轉,，瓶底朝上,，向瓶內注入適量的培養(yǎng)液,，將培養(yǎng)瓶放置在
37℃恒溫箱內培養(yǎng)。
5,、放置待組織小塊貼附后,，將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉平放，使組織浸入培養(yǎng)液中（勿

使組織漂起）,，37℃繼續(xù)培養(yǎng),。

二、消化培養(yǎng)法
1,、取材,，用 Hank's 液洗滌三次，并剔除脂肪,，結締組織,，血液等雜物。
2,、用手術剪將組織剪切成 1mm3 左右的小塊,，再用 Hank's 液洗三次。
3,、視組織塊量加入酶液,，37℃中消化 20—40 分鐘，每隔 5 分鐘振蕩一次,，或用
吸管吹打一次,，使細胞分離。
4,、加入 3—5ml 培養(yǎng)液以終止酶消化作用（或加入相關酶抑制劑）,。
5,、靜置 5—10 分鐘，使未分散的組織塊下沉,，取懸液加入到離心管中,。
6、1000rpm,，離心 10 分鐘,，棄上清液。
7,、加入 Hank's 液 5ml,，沖散細胞，再離心一次,，棄上清液,。
8、加入培養(yǎng)液 1—2ml（視細胞量）,，血球計數板計數,。

9、將細胞轉移到培養(yǎng)瓶中,，37℃下培養(yǎng),。

三、 器官培養(yǎng)
1,、將不銹網做成支架形狀,，調整其高度至培養(yǎng)皿的 1/2 深度平面，在其表面放
置 0.5μm 孔徑濾膜,。
2,、將培養(yǎng)液加入培養(yǎng)皿中，使液面剛剛接觸到濾膜,，但不要使其浮起,。
3、將要培養(yǎng)器官組織放在濾膜上,，一般厚度不要超過 200μm，水平面積不超過
10mm2,。
4,、將上述準備好的培養(yǎng)物放入 CO2培養(yǎng)箱，并加注氧氣調整氧分壓,，最好到 90%,。
5、培養(yǎng)過程中要注意觀察培養(yǎng)液平面,，盡可能保持在與濾膜一致的水平上,。
6,、上述可進行器官培養(yǎng) 1-3 周，每 2-3 天換液一次,，并根據情況做進一步實驗
和檢測,。