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小鼠心肌細胞傳代、凍存,、復蘇說明
小鼠心肌細胞傳代,、凍存、復蘇說明
小鼠心肌細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min；
3）棄上清,，沉淀細胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸,，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃,，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
小鼠心肌細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次,；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min,；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中,；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃,。
4,、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍,，直至凍存管中無結晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁,；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中,， 1000rpm離心5min；
3）棄上清,，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃,，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。