小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凍存方法:
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞|細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),,應(yīng)將細(xì)胞收集,,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),,加入部分新鮮培養(yǎng)基,,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)蘇的原則:
快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,,使小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞|細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,,對(duì)細(xì)胞造成損害,。
小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自主動(dòng)脈組織;主動(dòng)脈是體循環(huán)的動(dòng)脈主干,。其運(yùn)行路徑為:升主動(dòng)脈起于左心室,,至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動(dòng)脈弓,弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動(dòng)脈,;在第12胸椎體高度穿膈的主動(dòng)脈裂孔移行為腹主動(dòng)脈,,以上為胸主動(dòng)脈,至第4腰椎體下緣分為左,、右髂總動(dòng)脈,;髂總動(dòng)脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動(dòng)脈,。主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是覆蓋在主動(dòng)脈內(nèi)面的單層細(xì)胞,,可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài),當(dāng)其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導(dǎo)致一些心血管疾病的發(fā)生,。因此,,主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞已成為研究心血管疾病發(fā)病機(jī)制及治療藥物不可缺少的工具。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細(xì)胞,,由一層扁平細(xì)胞所組成,。它形成血管的內(nèi)壁,是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁(單層鱗狀上皮)的接口,。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng),,由心臟直至最小的微血管。