原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞,、組織和器官后立即進行培養(yǎng),。因此,,較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),,此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì),,如果是正常細胞,仍然保留二倍體數(shù),。但實際上,,通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。
常用的原代細胞的培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細胞培養(yǎng),。
組織塊培養(yǎng)是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上,,加入培養(yǎng)基后進行培養(yǎng)。
分散細胞培養(yǎng)大致步驟為:
將動物組織從機體中取出離散成單個細胞(常用胰蛋白酶),,置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),,使細胞得以生存、生長和繁殖(注意整個過程無菌),。
原代細胞的基因表達分析能使研究者更好的理解生物學通路和疾病進程,,如細胞周期規(guī)律,,干細胞生物學,癌癥發(fā)展和神經(jīng)紊亂等,。原代細胞成為追求突破和更好療法的有力工具,。
雖然原代細胞有諸多優(yōu)點,但獲得高純度的原代細胞是一個艱巨的過程,。比起細胞系,,原代細胞可謂是極其敏感,需要額外添加經(jīng)典培養(yǎng)基所沒有的營養(yǎng),。原代細胞要在專為每種細胞定制的特殊培養(yǎng)液中存活和生長,。例如內(nèi)皮細胞與上皮細胞或神經(jīng)元的營養(yǎng)需求就大為不同,因此需要不同的特殊培養(yǎng)基,。
優(yōu)點
(1) 細胞剛離開機體,,生物學性狀與原體內(nèi)細胞比較接近,相比之下,,細胞系的一個缺點是它們往往與原始的組織有不一樣的遺傳和表型,,而原代細胞保持了細胞在體內(nèi)的許多重要標志和功能。
(2) 細胞的初代培養(yǎng)也是建立各種細胞株(系)的必經(jīng)階段,。
應用:
1,、為研究生物體細胞的生長、代謝,、繁殖提供有力的手段,;
2、為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件,;
3,、服務于臨床實踐,用于藥物篩選等,。