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原代細(xì)胞的取材基本要求介紹
原代細(xì)胞（primary culture cell）是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞,。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子,、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,，如蛋白質(zhì)組學(xué),、基因組學(xué),、細(xì)胞株（系）研究,、DNA，RNA和遺傳學(xué)研究等,，還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選,、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等,。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)
原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞,、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因此,，較為嚴(yán)格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),，如果是正常細(xì)胞,，仍然保留二倍體數(shù),。但實(shí)際上,，通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng),。
常用的原代細(xì)胞的培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。
組織塊培養(yǎng)是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上,，加入培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng),。
分散細(xì)胞培養(yǎng)大致步驟為：
將動(dòng)物組織從機(jī)體中取出離散成單個(gè)細(xì)胞(常用胰蛋白酶),，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞得以生存,、生長(zhǎng)和繁殖(注意整個(gè)過(guò)程無(wú)菌)。
原代細(xì)胞的質(zhì)量取決于多個(gè)因素：組織,、培養(yǎng)基、特別是它還與實(shí)驗(yàn)人員分離組織的技術(shù)息息相關(guān),。如果你對(duì)分離組織不甚精通或者很難保證組織來(lái)源地穩(wěn)定性,，市售的原代細(xì)胞是一種不錯(cuò)的選擇。
細(xì)胞系培養(yǎng)相當(dāng)成熟且普遍,，但有時(shí)會(huì)得到一些難以解釋的結(jié)果,。想不想得到更多符合體內(nèi)正常生理?xiàng)l件的數(shù)據(jù),？從細(xì)胞系轉(zhuǎn)向原代細(xì)胞,，情況一定會(huì)有所好轉(zhuǎn),。原代細(xì)胞培養(yǎng)模擬了體內(nèi)的狀態(tài)，能讓你獲得更多這樣的數(shù)據(jù),。
原代細(xì)胞的取材基本要求
（1）取材要注意新鮮和保鮮 新鮮組織易于培養(yǎng)成功，取材時(shí)應(yīng)盡量在4~6h內(nèi)能制作成細(xì)胞,，盡快入箱培養(yǎng),，若不能即時(shí)培養(yǎng),，應(yīng)將組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi),，于4℃存放。若組織塊較大,，應(yīng)在清除表面血、壞死組織,、脂肪和結(jié)締組織后,，切碎于培養(yǎng)液內(nèi)4℃存放,，但時(shí)間不能超過(guò)24h.對(duì)于已切碎的組織或血液,、淋巴組織應(yīng)加入含10%二甲基亞砜的培養(yǎng)基,，按細(xì)胞凍存方式于液氮中冷凍保存,。
（2）取材應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌 所取標(biāo)本材料應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行,，為了確保無(wú)菌,，對(duì)所取材料若疑有污染的可能,，應(yīng)將所取組織在含高濃度抗菌素（400單位/mL）甚至加入適量的***或10%達(dá)克寧液的培養(yǎng)液內(nèi)于4℃下存放2小時(shí)以上，再用PBS洗2~3次,，以確保所取材料無(wú)菌,。要用無(wú)菌包裝的器皿或事先消毒好的帶少許培養(yǎng)液（內(nèi)含400單位/mL抗菌素）的小瓶等便于攜帶的物品來(lái)取材,，所取材料應(yīng)避免接觸有毒有害的化學(xué)物質(zhì)，如碘,、汞等,。
（3）取材和原代細(xì)胞制作時(shí)，要用鋒利的器械,，如手術(shù)刀或剃須刀片切碎組織,，盡可能減少對(duì)細(xì)胞的機(jī)械損傷。
（4）要仔細(xì)去除所取材料上的血液,、脂肪,、壞死組織及結(jié)締組織，切碎組織時(shí)應(yīng)避免組織干燥,，可在含少量培養(yǎng)液的器皿中進(jìn)行,。
（5）原代細(xì)胞取材時(shí)要同時(shí)留好組織學(xué)標(biāo)本和電鏡標(biāo)本。對(duì)組織的來(lái)源,、部位,、包括供體的一般情況要做詳細(xì)的記錄,，以備以后查詢。
（6）取材應(yīng)注意組織類型,、分化程度、年齡等,，一般來(lái)講,，胚胎組織較成熟個(gè)體組織容易培養(yǎng),，分化低的較分化高的組織容易生長(zhǎng),，腫瘤組織較正常組織容易培養(yǎng),。取材時(shí)應(yīng)盡量選用易培養(yǎng)的組織進(jìn)行培養(yǎng),。