人臍靜脈內(nèi)皮細胞在進行血管內(nèi)皮細胞實驗時,,通常選用的細胞模型為人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells,,簡稱HUVECs),。而不是直接采用靜脈血管內(nèi)皮細胞或動脈血管內(nèi)皮細胞,。原因是臍靜脈內(nèi)皮細胞具有干細胞的潛能,,理論上可以傳代50-60次,。
人臍靜脈內(nèi)皮細胞消化方法:消化液:用pH7.0-7.2的PBS或D-Hank’S液,,分別配制0.25%胰酶液和0.02%EDTA-Na2液,用前按1:1混合,。在細胞傳代或凍存前先消化細胞,。具體操作如下:吸凈培養(yǎng)液,每瓶加消化液1ml,,搖勻使其布滿培養(yǎng)瓶細胞面,。37℃消化2-5分鐘。顯微鏡下看細胞回縮成圓形后,,輕輕震動使絕大部細胞脫落后,,每瓶加含10%FBS的RPMI-1640液的中和液4-5ml中和胰酶的消化作用,并用吸管輕輕吹打培養(yǎng)面使細胞*脫落后,,吸至15ml無菌離心管內(nèi),。4℃1500rpm離心10分鐘棄上清,再用中和液洗滌細胞,,離心棄上清,,加適量RPMI-1640液,混勻后取10ul 細胞懸液加10ul臺盼藍混勻后作細胞計數(shù),,按需要做步驟四或五,。
人臍靜脈內(nèi)皮細胞細胞復蘇:
從液氮中取出細胞凍存管,,迅速放入37℃水浴中解凍至管內(nèi)殘留一點冰屑。用75%酒精擦拭凍存管后,,將內(nèi)容物吸至一15ml無菌離心管中,,逐滴加入預溫至37℃的RPMI-1640培液4-5ml混勻,室溫1500rpm離心10分鐘棄上清,。再用RPMI-1640培液4-5ml洗滌一次,,離心后棄上清,加HUVEC*培養(yǎng)液4-5ml備用,,每支HUVEC凍存管含細胞量為5×105個,。