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人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞消化和復(fù)蘇的步驟方法

時(shí)間:2022-2-23 閱讀:541
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  人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在進(jìn)行血管內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)時(shí),,通常選用的細(xì)胞模型為人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,,簡(jiǎn)稱HUVECs)。而不是直接采用靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞或動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,。原因是臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞具有干細(xì)胞的潛能,,理論上可以傳代50-60次。
  人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞消化方法:消化液:用pH7.0-7.2的PBS或D-Hank’S液,,分別配制0.25%胰酶液和0.02%EDTA-Na2液,,用前按1:1混合。在細(xì)胞傳代或凍存前先消化細(xì)胞,。具體操作如下:吸凈培養(yǎng)液,,每瓶加消化液1ml,搖勻使其布滿培養(yǎng)瓶細(xì)胞面,。37℃消化2-5分鐘,。顯微鏡下看細(xì)胞回縮成圓形后,,輕輕震動(dòng)使絕大部細(xì)胞脫落后,每瓶加含10%FBS的RPMI-1640液的中和液4-5ml中和胰酶的消化作用,,并用吸管輕輕吹打培養(yǎng)面使細(xì)胞*脫落后,,吸至15ml無菌離心管內(nèi)。4℃1500rpm離心10分鐘棄上清,,再用中和液洗滌細(xì)胞,,離心棄上清,加適量RPMI-1640液,,混勻后取10ul 細(xì)胞懸液加10ul臺(tái)盼藍(lán)混勻后作細(xì)胞計(jì)數(shù),,按需要做步驟四或五。
  人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞復(fù)蘇:
  從液氮中取出細(xì)胞凍存管,,迅速放入37℃水浴中解凍至管內(nèi)殘留一點(diǎn)冰屑,。用75%酒精擦拭凍存管后,將內(nèi)容物吸至一15ml無菌離心管中,,逐滴加入預(yù)溫至37℃的RPMI-1640培液4-5ml混勻,,室溫1500rpm離心10分鐘棄上清。再用RPMI-1640培液4-5ml洗滌一次,,離心后棄上清,,加HUVEC*培養(yǎng)液4-5ml備用,每支HUVEC凍存管含細(xì)胞量為5×105個(gè),。

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