PriCells: 原代細(xì)胞核仁的制備                                                                                        

試劑和器材： 
1. 懸浮緩沖液：0.34mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl^₂,、10mmol/L Tris-HCl,，pH7.5；
2. 密度阻滯溶液：0.88mol/L蔗糖,、0.05mmol/L MgCl^₂,、10mmol/L Tris-HCl，pH7.5,；
3. 按要求向溶液中加入蛋白酶抑制劑,；
4. 吊桶式低溫低速或高速離心機；
5. 超聲發(fā)生器,；
6. 光學(xué)顯微鏡（相差或普通光學(xué)顯微鏡）,；

實驗方法：
   所有操作須在0—4℃完成。
1. 將純化的原代細(xì)胞細(xì)胞核溶于懸浮緩沖液中,；
2. 超聲處理懸液10—15s,，中間間隔30—40s,；
3. 用1g/L美藍(lán)染色，通過相差或普通光學(xué)顯微鏡監(jiān)測核的破裂,。通常原代細(xì)胞細(xì)胞核*破裂需要40—60s的超聲處理,；
4. 在離心管中，將超聲處理物加入到一半體積的密度阻滯溶液上,，2000g離心20min并收集核仁沉淀,；