PriCells: 原代細胞核仁的制備
PriCells: 原代細胞核仁的制備
試劑和器材:
1. 懸浮緩沖液:0.34mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl2,、10mmol/L Tris-HCl,,pH7.5;
2. 密度阻滯溶液:0.88mol/L蔗糖,、0.05mmol/L MgCl2,、10mmol/L Tris-HCl,pH7.5,;
3. 按要求向溶液中加入蛋白酶抑制劑;
4. 吊桶式低溫低速或高速離心機,;
5. 超聲發(fā)生器,;
6. 光學顯微鏡(相差或普通光學顯微鏡);
實驗方法:
所有操作須在0—4℃完成,。
1. 將純化的原代細胞細胞核溶于懸浮緩沖液中,;
2. 超聲處理懸液10—15s,中間間隔30—40s,;
3. 用1g/L美藍染色,,通過相差或普通光學顯微鏡監(jiān)測核的破裂。通常原代細胞細胞核*破裂需要40—60s的超聲處理,;
4. 在離心管中,,將超聲處理物加入到一半體積的密度阻滯溶液上,,2000g離心20min并收集核仁沉淀;