PriCells: 等密度離心法去除紅細胞和死細胞
PriCells: 等密度離心法去除紅細胞和死細胞
器材和試劑:
所有直接接觸細胞的用品和試劑必須無菌。
1. 標注體積刻度的試管(圓錐形底);
2. 巴斯德吸管(短型和長型),;
3. 10ml刻度吸管和洗耳球或移液裝置;
4. 臺式離心機,;
5. 淋巴細胞分離液或類似試劑,;
6. 培養(yǎng)基;
實驗方法:
1. 重懸細胞使之達到5×106—107個/ml的高濃度,。在一個離心管中加入10ml淋巴細胞分離液,,用巴斯德吸管或10ml移液管小心將5ml的原代細胞懸液加于淋巴細胞分離液面上。將容器傾斜一個角度,,沿容器壁慢慢地將細胞懸液滴下,,而不是直接滴到淋巴細胞分離液表面,。目的是在兩種液體之間得到一個清晰的界面,以便更好地分離,;
2. 不制動1000r/min離心試管20min(注:離心時緩慢地減速可使淋巴細胞分離液與培養(yǎng)基之間形成清晰的界面),;
3. 從離心機中小心地取出容器,觀察兩液面之間的界面,,可見一乳狀黃色細胞帶,。紅細胞和死細胞形成沉淀沉于容器底部;
4. 用一個巴斯德吸管吸出界面可見的細胞層,,轉入一個離心管,;
5. 向收集的細胞中加入新鮮培養(yǎng)基并混勻。1000r/min離心5min,,重復兩次,,洗去細胞表面的淋巴細胞分離液;
6. 將細胞重懸于已知體積的培養(yǎng)基中,,進行細胞計數(shù)和活力測定,;