PriCells: 原代細胞周期測定的原理和BrdU方法                              

原理:
細胞周期:細胞一世代所經歷的時間從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束一個周期,。細胞周期反應了細胞增殖速度,。單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期,，故現(xiàn)采用其他方法測群體周期,。
測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法,、細胞計法等,。
BrdU（5溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養(yǎng)基后，可做為細胞DNA復制的原料,，經兩個細胞周期后,，細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2，反映在染色體上應表現(xiàn)為一條單體淺染,。如經歷了三個周期,，則染色體中約一半為兩條單體均淺染，另一半為一深一淺,。細胞如果僅經歷了一個周期,，則兩條單體均深染。計分裂相中各期比例,，就可算出細胞周期的值,。

試劑

1、儀器,、用品：同常規(guī)細胞培養(yǎng)
2,、試劑：BrdU（1.0mg/ml），甲醇,、冰醋酸,，Giemsa染液，秋水仙素,，2×SSC液

BrdU方法
　　1,、原代細胞生長至指數期時，向培養(yǎng)液中加入BrdU,，最終濃度為10μg/ml,。
　　2、44小時加秋水仙素,，使每ml中含0.1μg,。
　　3,、48小時后常規(guī)消化細胞至離心管中，注意培養(yǎng)上清的漂浮細胞也要收集到離心管中,。
　　4,、常規(guī)染色體制片。
　　5,、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,，鋪上2×SSC 液，距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘,。
　　6,、棄去2×SSC液，流水沖洗,。
　　7,、Giemsa液染色10分鐘，流水沖洗,，晾干,。
　　8、鏡檢100個分裂相,，計第一,、二、三,、四細胞期分裂指數,。
　　9、計算：細胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小時）
附：
（1）BrdU配制：BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存,。
（2）2×SSC配制：NaCl 1.75克,，檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克，加水至100ml,，4℃保存,。