PriCells: 正常角膜緣干細胞的免疫染色     

試劑和材料：
1. 一抗：
（1） ABCG2-----------------小鼠單克隆BXP-21---------1：100
（2） 連接蛋白-43-----------兔多克隆CX43-------------1：100
（3） 細胞角蛋白3（K3）-----小鼠單克隆AE5----------- 1：500
（4） 細胞角蛋白12（K12）---兔多克隆J7-------------- 1：200
2. 二抗；
（1） 抗小鼠IgG-------------Alexa-488----------------1:2500
（2） 抗兔IgG---------------Alexa-546----------------1:1500
3. 封閉抗體：PBSA配制的10%熱滅活羊血清,；
4. Trion X-100,；
5. PBSA,；
6. 多聚甲醛（PFA），將16%原液用PBSA現(xiàn)配成4%的工作濃度,；
7. Immu-Mount防褪色封片劑,；
8. 載玻片和#1蓋玻片；
9. 共聚焦顯微鏡,；

實驗方法：
1. 培養(yǎng)在塑料平皿或羊膜上的細胞,；
2. CMF-Saline G洗一遍；
3. 用新鮮配制的4% PFA室溫固定15min,；
4. PBSA洗一遍,；
5. 0.1% Triton X-100破膜10min；
6. 樣本與一抗室溫孵育1h,；
7. PBSA洗2遍,；
8. 加入二抗室溫孵育1h；
9. 用PBSA洗2遍,；
10. #1蓋玻片,，用最小體積的防褪色的封片劑封片；
11. 在熒光或共聚焦顯微鏡下用40×油鏡對樣本進行觀察,；