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PriCells: 原代懸浮細胞吉姆薩染色法
PriCells: 原代懸浮細胞吉姆薩染色法
涂片法：
1. 用含有5%—10%血清的等滲液將培養(yǎng)的細胞調制成密度為106個/ml的細胞懸液；
2. 將1滴細胞懸液滴于一張載玻片的一端,，用另一塊干凈的載玻片,，按照血液涂片法將細胞鋪展于載玻片上,；
3. 載玻片在空氣中干燥后，再用甲醇固定,；
4. 對涂有細胞的載玻片進行染色,；
5. 注意，為避免細胞皺縮應盡快使涂有細胞的載玻片干燥,，可搖動載玻片或用吹風機的冷風迅速吹干,；
6. 用甲醇固定，吉姆薩染色,；
離心法：
1. 需使用離心涂片機將細胞懸液的細胞直接離心沉淀在載玻片上,，使細胞的離心沉淀和涂片同時進行；
2. 制備細胞懸液,，細胞懸液中用含有少量蛋白質,，并將細胞濃度調至106個/ml；
3. 將濾紙片孔對準出孔,，然后插入機頭凹槽內,，用彈簧片頂緊，使濾紙片夾于標本室的出孔與載玻片之間,；
4. 離心標本必須對稱放置,，保持平衡。然后吸取細胞懸液0.1—0.2ml迅速滴入標本室入口,，以1000r/min離心5min,；
5. 離心完畢后自動關機。取出載玻片在空氣中干燥后,；
6. 用甲醇固定,，吉姆薩染色；
真空過濾法：
1. 用含有10%血清的培養(yǎng)液將培養(yǎng)物調制成濃度為106個/ml的細胞懸液,；
2. 取5—10ml細胞懸液,，用直徑為25mm、孔徑為0.5μm的Nucleopore多孔,；
3. 當過濾懸液還剩余2ml左右時,，輕輕加入110ml平衡鹽溶液繼續(xù)過濾，到剩余2ml時,，再加入10ml平衡鹽溶液,，繼續(xù)過濾。如此再重復一次。此步驟中平衡鹽溶液有漂洗細胞的作用,，既能保證細胞充分,、均勻地過濾，又為隨后的甲醇固定作好準備,；
4. 然后加10ml甲醇到平衡鹽溶液中,，一直重復到過濾出的液體是純甲醇為止；
5. 空氣中干燥,，待甲醇*揮發(fā)后,，進行吉姆薩染色；
染液制備：
1. 稱取0.5g吉姆薩粉和22ml甘油,；
2. 取少量甘油與吉姆薩粉在研缽內充分混合，研磨至無顆粒,；
3. 將剩余的甘油倒入研缽,，于56℃保溫2h；
4. 加入33ml純甲醇混勻,，即為吉姆薩母液,，將其保存于棕色試劑瓶內；
5. 取9份pH6.80—7.38的Sorensen緩沖液和1份吉姆薩母液混合即得染色液,；
6. 按2ml/cm2的比例滴加吉姆薩染液,，覆蓋細胞層，染色2min,；
7. 移除染液,，用自來水沖洗掉粉紅色背景后，再用去離子水沖洗細胞,；
8. 用顯微鏡觀察單層潮濕細胞,。若細胞已干，可重新使細胞潮濕后再觀察,；
結果：
細胞核被染成紫紅色或紫藍色,，而細胞質則被染成淺紅色；
注意事項：
1. 染液宜現(xiàn)用現(xiàn)配,，舊染液染色效果不佳,。染液保存時間不宜超過48h；
2. 吉姆薩對pH極敏感,，因此,，緩沖液pH要準確，否則染色效果不佳,。如用染色缸染色時,，隨染色時間的延長，在染液表面常形成一層氧化膜（發(fā)亮）易附著在玻片上形成污穢，且不易除掉,。因此在用染色缸染色,，尤其用的不是現(xiàn)配者時，染色前應先用小片濾紙刮除液面的氧化層再進行染色,。染色完畢,，應把標本浸入水中漂洗染液；
PriCells提供：
1. 各種原代細胞特制基礎培養(yǎng)基,；
2. 各種原代細胞培養(yǎng)特制添加劑,；
3. 原代細胞分離試劑盒；
4. 原代細胞鑒定試劑盒,；
5. 原代細胞總蛋白質抽提物,；
6. 原代細胞總RNA；
7. 原代細胞總DNA,；