PriCells: 正常大鼠巨噬細胞的培養(yǎng)

實驗材料：

1. 成年大鼠或小鼠,，采用腹腔取材法

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,，pH7.2

3. 培養(yǎng)基：RPMI1640,、Ham’s F12等均適于巨噬細胞的培養(yǎng)。大多數(shù)巨噬細胞的培養(yǎng)可加10%-40%的血清，小鼠巨噬細胞加10%小牛血清,，用無血清培養(yǎng)基亦可,。新生小牛血清中含有抗體，能刺激巨噬細胞成熟,，也可用乳清蛋白培養(yǎng)

4. 動物解剖臺或蠟板1個,，帶鉤眼科鑷子2支，解剖剪1個,，10ml注射器1個,，針頭數(shù)支，離心管2支,，吸管數(shù)支,，培養(yǎng)瓶數(shù)個，血細胞計數(shù)器1個,，Eagle液,，肝素（10U/ml）30ml，Eagle培養(yǎng)液（含10%小牛血清和青霉素,、鏈霉素）50ml

實驗方法：

1. 實驗前3d,，向每只小鼠腹腔內(nèi)注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml；

2. 引頸殺死動物,，手提鼠尾將全鼠浸入70%乙醇中3-5s,。置動物于解剖臺上，用針頭固定四肢,，雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側(cè),，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁;

3. 再用70%乙醇擦洗腹膜壁后,，用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中,，同時從兩側(cè)用手揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內(nèi)充分流動,；

4. 用針頭輕輕挑起腹壁,，使動物體微傾向一側(cè)，使腹壁中液體集中于針頭下吸取入針管內(nèi),。小心拔出針頭，把液體注入離心管中,，1000r/min,，離心10min后，去上清,，加10ml Eagle培養(yǎng)基,；

5. 計數(shù)細胞，每只小鼠可產(chǎn)生2×107—3×107個細胞，其中90%以上為巨噬細胞,。為純化培養(yǎng)細胞,，去除其他白細胞，接種數(shù)小時后,，去除培養(yǎng)液,，用Eagle液沖洗1—2次后，除去漂浮的細胞,，得到貼壁的巨噬細胞,。再加新Eagle培養(yǎng)液置37℃、5%CO2溫箱中培養(yǎng),；

6. PriCells-原代平滑肌細胞細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

7. PriCells-原代平滑肌細胞細胞培養(yǎng)特制添加劑

8. PriCells-原代細胞分離試劑盒

   9. PriCells-原代細胞鑒定試劑盒