日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

磁珠分選柱手工操作分離小鼠CD4+CD25+抑制性細(xì)胞

時(shí)間:2021-9-22 閱讀:467
分享:
PriCells: 磁珠分選柱手工操作分離小鼠CD4+ CD25+抑制性細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)材料:
1.    小鼠
2.    HBSS洗滌緩沖液
3.    MACS緩沖液
4.    CD8a(Ly-2)磁珠
5.    結(jié)合緩沖液
6.    biotin-抗CD25(7D4)
7.    Streptavidin-PE
8.    抗PE磁珠
9.    *RPMI培養(yǎng)基
10.    小鼠CD3+T細(xì)胞富集柱和1×純化柱緩沖液
11.    15ml離心管,,無(wú)菌
12.    autoMACS系統(tǒng)和分選柱
13.    30mm尼龍網(wǎng)或40mm預(yù)分離濾膜
14.    不含氣體的MACS緩沖液,4℃(在上樣和洗柱過(guò)程中保持冰冷)
15.    Midi MACS分離磁鐵
16.    MACS多用支架
17.    LD分選柱
18.    15ml離心管,,無(wú)菌
19.    LS分選柱
實(shí)驗(yàn)方法:
1.    用20只小鼠的淋巴結(jié)制備單細(xì)胞懸液并去除紅細(xì)胞,。
2.    將細(xì)胞在20mlHBSS洗滌緩沖液中混懸后用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。
3.    將細(xì)胞懸液在4℃,,200g離心10min,。離心過(guò)程中,準(zhǔn)備3支小鼠CD3+T細(xì)胞純化柱,,按說(shuō)明書(shū)的指導(dǎo)用1×純化柱緩沖液洗3遍,。棄洗脫液,在每支純化柱下方放置一支15ml離心管,。
4.    用3ml 1×純化柱緩沖液和3ml HBSS洗滌緩沖液混懸細(xì)胞,。將細(xì)胞通過(guò)30mm尼龍網(wǎng)或40mm預(yù)分離濾膜后,每支純化柱中加入2ml細(xì)胞,。室溫孵育15min,。
5.    用2ml 1×純化柱緩沖液洗滌純化柱4或5遍以洗脫T細(xì)胞。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)后,,將細(xì)胞懸液在4℃,,200g離心10min。
6.    將沉淀按每108個(gè)細(xì)胞加0.9ml MACS緩沖液的比例混懸,。每108個(gè)細(xì)胞加入0.1ml CD8a(Ly-2)磁珠后4℃孵育15min,。
7.    4℃,200g離心10min,。
8.    按前述方法制備單細(xì)胞懸液,,純化T細(xì)胞并加入CD8a(Ly-2)磁珠。
9.    將Midi MACS分離磁鐵安裝到MACS多用支架上,,并將LD分選柱放到磁鐵中,,每次用3ml 4℃不含氣體的MACS緩沖液沖洗分選柱共3次。棄洗脫液,,在分選柱下方放置一支新的無(wú)菌15ml離心管,。
10.    離心結(jié)束后棄上清,,將沉淀用108個(gè)細(xì)胞/ml的MACS緩沖液*混懸,。將細(xì)胞通過(guò)30mm尼龍網(wǎng)或40mm預(yù)分離濾膜,。用0.1-0.4ml MACS緩沖液沖洗濾網(wǎng)。
11.    將細(xì)胞懸液上樣到LD分選柱上,。
12.    用MACS緩沖液沖洗分離柱每次3ml,,共3次。第一個(gè)3ml應(yīng)緩慢加入以免擾動(dòng)分選柱中的細(xì)胞,。將洗脫液作為陰性細(xì)胞(CD4+ 細(xì)胞)保存,。
13.    將細(xì)胞懸液在4℃,200g離心10min,。
14.    用結(jié)合緩沖液混懸細(xì)胞使其濃度達(dá)到108個(gè)細(xì)胞/ml,。每108個(gè)細(xì)胞加入15mg biotin-抗CD25(7D4)。4℃孵育15min,。4℃,,200g離心10min。
15.    用結(jié)合緩沖液混懸細(xì)胞使其濃度達(dá)到108個(gè)細(xì)胞/ml,。每108個(gè)細(xì)胞加入7.5mg Streptavidin-PE,。4℃孵育15min。
16.    4℃,,200g離心10min.
17.    用MACS緩沖液混懸細(xì)胞使其濃度達(dá)到108個(gè)細(xì)胞/ml,。每108個(gè)細(xì)胞加入0.1ml 抗PE磁珠。4℃孵育15min,。
18.    4℃,,200g離心10min。
19.    按前述方案用結(jié)合緩沖液混懸細(xì)胞后加入biotin-抗CD25,、Streptavidin-PE,,以及抗PE磁珠。
20.    用MACS緩沖液混懸細(xì)胞使其濃度達(dá)到108個(gè)細(xì)胞/ml,。
21.    將一支LS分選柱放在Midi MACS分離磁鐵上,,用MACS緩沖液每次3ml洗3遍L(zhǎng)S柱。棄洗脫液,,在分選柱下方放置一支新的15ml離心管,。
22.    離心結(jié)束后棄上清,將沉淀用MACS緩沖液*混懸使細(xì)胞濃度達(dá)到108個(gè)細(xì)胞/ml,。
23.    將細(xì)胞通過(guò)30mm尼龍網(wǎng)或40mm預(yù)分離濾膜,。用0.1-0.4ml MACS緩沖液沖洗濾網(wǎng)。
24.    將細(xì)胞懸液加到LS柱上,。
25.    用MACS緩沖液沖洗分離柱每次3ml,,共3次。第一個(gè)3ml應(yīng)緩慢加入以免擾動(dòng)分選柱中的細(xì)胞,。將洗脫液作為陰性細(xì)胞(CD4+ CD25-細(xì)胞)保存,。
26.    將分選柱從磁鐵上取下,。在分離柱中加入5ml MACS緩沖液。將活塞塞進(jìn)分離柱并洗脫陽(yáng)性細(xì)胞(CD4+ CD25+細(xì)胞),。
27.    將細(xì)胞在4℃,,200g離心10min。將CD25+細(xì)胞用1-2ml RPMI*培養(yǎng)基混懸,。將CD25-細(xì)胞用10ml RPMI*培養(yǎng)基混懸,。計(jì)數(shù)。



會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏,!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
撥打電話 產(chǎn)品分類
在線留言