取人或動物體內(nèi)（或胚胎）的組織,，將其剪碎至1mm3的組織塊,，再采用的如下方法進(jìn)行分離培養(yǎng)：

一、懸浮細(xì)胞的分離方法
1,、將血液,、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中,，1000rpm/分鐘離心5分鐘,。
2、去掉上清,，離心沉淀用無鈣,、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘。此步重復(fù)兩次,。
3,、用培養(yǎng)基重懸，調(diào)整適當(dāng)細(xì)胞濃度后分瓶培養(yǎng),。
4,、如選用懸液中某種細(xì)胞，可采用離心后的細(xì)胞分層液收獲目的細(xì)胞,。

二,、實(shí)體組織材料的分離方法

（一）機(jī)械分散法
1、纖維成分很少的腦組織,，部分胚胎組織,，用剪刀剪碎至1mm³的組織塊。
2,、用PBS清洗兩次后
①用吸管吹打,，分散組織細(xì)胞。
②或?qū)⒁殉浞旨羲榉稚⒌慕M織放在注射器內(nèi)（用九號針）,，使細(xì)胞通過針頭壓出,。
③或在不銹鋼紗網(wǎng)內(nèi)用鈍物（注射器鈍端）壓擠使細(xì)胞從網(wǎng)孔中壓擠出。
3,、收集細(xì)胞轉(zhuǎn)入離心管中,，1000rpm/分鐘離心5分鐘。
4,、去上清,，加入含血清的培養(yǎng)基,，重懸后移至培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

（二）消化分離法
1,、酶消化分離法（過夜冷消化法）
①細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織,，如肝、腎,、甲狀腺,、羊膜、胚胎組織,、上皮組織等,，用Hanks液清洗組織三次，剪成碎塊大小為4毫米左右,。
②再用Hanks液洗2-3次以除去血球和脂肪組織,。
③加入0.25%的胰蛋白酶，搖勻后放4℃過夜,。
④次日再用Hanks液洗滌,，棄去上清，共洗2-3次,。
⑤加入少量含血清的培養(yǎng)基吹打分散,，細(xì)胞計(jì)數(shù)，按適當(dāng)?shù)臐舛确制颗囵B(yǎng),。

2,、非酶消化法（EDTA消化法）
①把組織塊剪碎，呈1mm³大小的組織塊,。
②將碎組織塊在平皿中用無鈣鎂PBS洗2-3次,。
③加入消化液（胰蛋白酶或膠原酶或EDTA）于37℃水浴中作用適當(dāng)時間（中間可輕搖1~2次），若組織塊膨松呈絮狀可終止,，若變化不大可更換一次消化液,，繼續(xù)消化直至膨松絮狀為止。
④棄去上清,，加入含有鈣,、鎂離子的培養(yǎng)基中止消化反應(yīng)，并洗滌2-3次后,，加入*培養(yǎng)基,。
⑤用吸管吹打，使細(xì)胞充分散開后用紗網(wǎng)過濾后分瓶培養(yǎng),。